地黃寡糖對(duì)HepG2細(xì)胞（人肝癌細(xì)胞株）胰島素抵抗的改善作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：以中藥地黃的提取物——地黃寡糖為研究對(duì)象，采用HepG2細(xì)胞株，運(yùn)用現(xiàn)代藥理學(xué)研究方法和分子生物學(xué)研究方法，探討研究地黃寡糖對(duì)肝胰島素抵抗的改善作用及分子機(jī)制。 方法：用四甲基偶氮唑鹽(MTT)方法檢測HepG2細(xì)胞的增殖；同時(shí)采用高胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立胰島素抵抗細(xì)胞模型；檢測地黃寡糖對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的影響；分別采用葡萄糖-6-磷酸脫氫酶偶聯(lián)比色法、乳酸脫氫酶偶聯(lián)比色法、鉬酸銨定磷法及葸酮法測定

2、胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)葡萄糖激酶(GK)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的活性和糖原含量；運(yùn)用RT-PCR技術(shù)，檢測地黃寡糖對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)一些關(guān)鍵基因表達(dá)的影響，包括轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和調(diào)控細(xì)胞分化、脂代謝的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)和胰島素受體(IR)；調(diào)節(jié)體內(nèi)葡萄糖代謝的重要細(xì)胞因子葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)。 結(jié)

3、果：在中濃度葡萄糖培養(yǎng)基中，高濃度(10～30 mg·L<'-1>)的地黃寡糖促進(jìn)HepG2細(xì)胞的增殖，低濃度(0.1～3 mg·L<'-1>)則抑制HepG2細(xì)胞的增殖，作用呈明顯的量效關(guān)系；地黃寡糖(0.1～30 mg·L<'-1>)可促進(jìn)HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗，最佳濃度為10 mg·L<'-1>；地黃寡糖(0.1～100 mg·L<'-1>)能夠促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的葡萄糖消耗，增強(qiáng)對(duì)胰島素的敏感性，并且還能夠明顯對(duì)抗

4、高胰島素誘導(dǎo)的胰島素抵抗效應(yīng)，在一定程度上預(yù)防或逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的發(fā)展。地黃寡糖可降低胰島素抵抗HepG2細(xì)胞內(nèi)葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的活性，增強(qiáng)葡萄糖激酶的活性和增加糖原含量，改善HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的狀態(tài)。地黃寡糖能夠促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞中PPAR-α、IR、GLUT4 mRNA的表達(dá)；能夠明顯降低GLUT2基因mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：高濃度地黃寡糖促進(jìn)HepG2增殖，低濃度則抑制其增殖；地黃寡

5、糖可明顯地促進(jìn)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗，在一定程度上預(yù)防或逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的發(fā)展；地黃寡糖可以抑制胰島素抵抗HepG2細(xì)胞的糖異生作用，減少細(xì)胞內(nèi)源性葡萄糖的產(chǎn)生，同時(shí)加快糖酵解的進(jìn)行，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的利用，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的糖原含量，對(duì)HepG2胰島素抵抗具有明顯的改善作用，其機(jī)制可能與激活PPAR-α、調(diào)節(jié)HepG2內(nèi)IR及GLUT2 mRNA的表達(dá)有關(guān)。該項(xiàng)研究初步闡明了地黃寡糖改善肝胰島素抵抗地作用及其分子機(jī)制，為地黃寡糖防