下調(diào)TCF7L2對胰島素抵抗HepG2細胞胰島素降解酶表達的調(diào)控作用觀察.pdf

1、目的：探討下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子7類似物2（Transcription factor7-like2， TCF7L2）對胰島素抵抗（Insulin resistance，IR）HepG2細胞胰島素降解酶（Insulin degrading enzyme，IDE）表達的調(diào)控及可能機制。
　　方法：細胞分組,將HepG2細胞分為空白組、TCF7L2干擾組、空載體組、IR組、IR+TCF7L2干擾組、IR+空載體組。采用高濃度胰島素（5×10-6m

2、ol/L）持續(xù)作用24h誘導IR模型（IR-HepG2細胞）生成。以人TCF7L2 mRNA編碼序列作為干擾靶點構(gòu)建TCF7L2特異性小干擾RNA慢病毒載體（LV-TCF7L2-siRNA）轉(zhuǎn)染空白組及IR組細胞,空載體病毒轉(zhuǎn)染空載體組及 IR+空載體組細胞。qRT-PCR法檢測各組細胞TCF7L2及IDE mRNA的表達，Western blotting檢測各組細胞TCF7L2、IDE、胰島素刺激后蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表達的變

3、化，流式細胞術(shù)檢測各組2-脫氧-D-葡萄糖（2-NBDG）熒光葡萄糖攝取率。
　　結(jié)果：與空白組比較，IR組細胞葡萄糖消耗量及2-NBDG攝取率均明顯降低（P＜0.01），證明 IR細胞模型建立成功。qRT-PCR及 Western blotting結(jié)果顯示，IR組TCF7L2及IDE mRNA及蛋白表達水平均明顯低于空白組（P＜0.05），TCF7L2干擾組TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表達水平較空白組、空載體組均明顯下降

4、，IR+TCF7L2干擾組TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表達水平較IR組、IR+空載體組均明顯下降（P＜0.05）。生理劑量胰島素刺激后，IR組、IR+TCF7L2干擾組p-AKT蛋白水平較空白組明顯下降（P＜0.01），各組總AKT水平差異無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。TCF7L2干擾組2-NBDG熒光葡萄糖攝取率較空白組和空載體組明顯下降，IR+TCF7L2干擾組2-NBDG熒光葡萄糖攝取率較IR組、IR+空載體組明顯下降（P