黃連木葉片提取物對(duì)小鼠3T3-L1脂肪細(xì)胞的作用研究.pdf

1、肥胖主要是由于長(zhǎng)期能量的攝入大于能量的消耗，能量代謝不平衡而引起的疾病。肥胖同時(shí)還會(huì)誘發(fā)II型糖尿病、心血管疾病，增加罹患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。2014年，我國(guó)已成為全球肥胖患者最多的國(guó)家。
　　治療肥胖的方法，主要包括減少能量和食物的攝入、增加能量的消耗、抑制脂肪細(xì)胞的分化和增殖、抑制脂肪的生成、增加肥胖的分解和氧化等。抑制脂肪生成是實(shí)現(xiàn)減肥的方法之一，尋找能夠抑制脂肪生成的藥物成為研究的熱點(diǎn)。
　　市場(chǎng)上充斥著各種各樣的減肥藥，而

2、減肥藥的安全性卻受到質(zhì)疑，常常伴隨副作用，同時(shí)一旦停藥，體重反彈。天然產(chǎn)物為設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)新的天然減肥藥提供了新機(jī)會(huì)。臨床上應(yīng)用的一些中藥引起了人們的關(guān)注。植物來(lái)源的生物化合物或許具有治療肥胖或是降低與肥胖相關(guān)疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
　　黃連木為漆樹(shù)科黃連木屬雌雄異株的植物，全身是寶，具有重要的經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值，其更多的應(yīng)用價(jià)值亟待開(kāi)發(fā)。黃連木五倍子的單寧酸含量非常豐富，用于治療潰瘍、緩解咳嗽、止血，黃連木的葉片中含有多種黃酮和多酚化合物，這些天

3、然抗氧化和植物的次級(jí)代謝產(chǎn)物能夠使人的機(jī)體免受自由基的傷害，延緩慢性疾病的發(fā)展。
　　本研究中，我們選取了黃連木葉片作為我們的研究對(duì)象，由于黃連木是雌雄異株的植物，其次級(jí)代謝產(chǎn)物與季節(jié)變化的規(guī)律尚不明確，我們研究了雌雄黃連木葉片多酚和黃酮化合物的季節(jié)性變化。此外選取小鼠3T3-L1脂肪細(xì)胞作為體外研究的生物模型，探究黃連木葉片提取物對(duì)3T3-L1細(xì)胞的作用，并用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法研究了相關(guān)蛋白質(zhì)的變化情況，獲得了如下的主要結(jié)果：<

4、br>　　1.利用高效液相色譜的方法，鑒定出黃連木葉片中含有兒茶素、蘆丁、槲皮素、山奈酚等化合物。在季節(jié)更迭的過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)4月份葉片中的黃酮和多酚含量最高，其次是7月份含量高，這基本與黃連木生長(zhǎng)周期是一致的。雌樹(shù)兒茶素和蘆丁的含量始終高于雄樹(shù)的含量，而槲皮素和山奈酚的含量在5月份之前，雄樹(shù)的含量高于雌樹(shù)的含量，但過(guò)了5月份，雌樹(shù)的槲皮素、山奈酚的含量高于雄樹(shù)。利用分光光度計(jì)檢測(cè)了黃連木葉片中總多酚和總黃酮的含量的季節(jié)性變化。雌樹(shù)的總

5、多酚含量遠(yuǎn)比雄樹(shù)高。雄樹(shù)的總多酚沒(méi)有太大的變化，雌樹(shù)的總多酚含量由高到低再升高，在3月份和8月份有兩個(gè)峰值。4月份之后，雌樹(shù)的總黃酮含量高于雄樹(shù)的含量，雄樹(shù)總黃酮含量在4月份之后有所下降。在清除氧自由基的實(shí)驗(yàn)中，黃連木4月份雌樹(shù)葉片提取物抗氧化能力高于7月份和9月份的雌樹(shù)葉片提取物，與4月份黃連木化合物含量最高是一致的。
　　2.將100μg/mL的槲皮素、蘆丁、黃連木葉片提取物作用于3T3-L1細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞活力沒(méi)有太大的影響，卻

6、能夠降低細(xì)胞內(nèi)三酰甘油的含量，經(jīng)過(guò)三者處理的細(xì)胞直徑有變小的趨勢(shì)。此外，我們還檢測(cè)了處理后的3T3-L1細(xì)胞中與脂肪生成相關(guān)基因PPARγ2、C/EBPα和aP2的mRNA表達(dá)量的變化，發(fā)現(xiàn)這些基因的表達(dá)量均有下調(diào)，說(shuō)明黃連木葉片提取物具有抑制脂肪細(xì)胞分化、抑制脂肪生成的功效。
　　3.在100μg/mL黃連木葉片提取物作用的3T3-L1的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，鑒定了4457個(gè)蛋白，標(biāo)記的蛋白有3368個(gè)，其中有37個(gè)蛋白表達(dá)差異。上

7、調(diào)的蛋白有14個(gè)，包括Collagen alpha-1(I) chain、Collagen alpha-2(V) chain、Collagen alpha-2(IV) chain和fibronectin等，下調(diào)的蛋白有23個(gè)，包括Follistatin-related protein1、60S ribosomal protein L17、60S ribosomal protein L19和Tensins-3等。我們對(duì)差異表達(dá)的蛋白進(jìn)行G