雪蓮注射液防治骨關(guān)節(jié)炎的作用及其機制探討.pdf

1、本研究內(nèi)容分為六部分： 第一部分：目的：本課題將結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)試驗的理論與方法，運用Hulth造模法制作兔OA動物模型，運用雪蓮注射液對膝骨關(guān)節(jié)炎動物模型進(jìn)行干預(yù)，通過對軟骨和滑膜標(biāo)本大體觀察、對軟骨細(xì)胞成分、基質(zhì)的光鏡和電鏡下觀測，以及從細(xì)胞因子、透明質(zhì)酸、氧自由基代謝等多方面指標(biāo)的改變，探索雪蓮注射液防治OA的作用機理，為臨床使用提供理論支持． 方法： 1.體內(nèi)實驗：動物隨機編為4組，A組、B組、C組和D組，A、

2、B、C組建立骨關(guān)節(jié)炎動物模型，D組正常喂養(yǎng)。 2.體外試驗：分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞，傳代細(xì)胞分Ⅰ、Ⅱ組，Ⅰ組給予不同濃度雪蓮注射液刺激，Ⅱa組予不同濃度雪蓮注射液干預(yù)24小時再予脂多糖(LPS，Lipopolysaccharide)刺激，Ⅱb組先予脂多糖(LPS)刺激24小時再予不同濃度雪蓮注射液干預(yù)，72小時后收集上清液檢測IL-1 β水平。 結(jié)果： 1.X片觀察：C組與D組相比，關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間隙明顯變窄，關(guān)節(jié)面粗糙，變

3、形，關(guān)節(jié)邊緣有明顯骨贅，軟骨下骨骨密度明顯增高，說明造模成功． 2.光鏡、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，A組動物在各個時間點的軟骨結(jié)構(gòu)、細(xì)胞排列和形態(tài)、軟骨基質(zhì)對Safranin-O異染性均優(yōu)于B、C組． 3.雪蓮注射液能夠降低骨關(guān)節(jié)炎模型動物關(guān)節(jié)液與體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞分泌IL-1β的水平． 4.A組在各時段的HA水平與D組之間沒有顯著性差異(P>0.05)，A組與B、C組各時段的HA水平有顯著(P<0.05)，B、C組和D組的H

4、A水平有顯著性差異(P<0.05)，B、C組間沒有顯著性差異。 5.除D組以外，各組12周時血清中NO含量均高于6周時；24周時血清中NO含量均高于12周時．NO的表達(dá)均逐漸升高，說明NO是參與膝OA發(fā)病進(jìn)程的重要介質(zhì)，病變的程度越重則含量越高；A組在各時點血清中NO含量均低于B組和C組(P<0.05)，說明雪蓮注射液能有效抑制骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病病理過程中的一氧化氮的產(chǎn)生；試驗顯示A組動物滑膜組織中SOD活性顯著高于B、C組(P<0

5、.05)，而MDA含量顯著低于B、C組(P<0.05)，B組與C組無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：雪蓮注射液能對軟骨細(xì)胞蛋白多糖PG表型的表達(dá)具有維持和保護(hù)作用，使破壞的膠原纖維與彈力纖維得到修復(fù)，使軟骨細(xì)胞的代謝恢復(fù)正常，進(jìn)而維持其結(jié)構(gòu)的完整性，延緩關(guān)節(jié)軟骨退變；有效抑制IL-1、NO的生物活性，增強SOD的生物活性，改善微循環(huán)，降低骨內(nèi)壓，從而達(dá)到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨的目的；促進(jìn)滑膜細(xì)胞產(chǎn)生透明質(zhì)酸和調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)液中微量元素，恢復(fù)

6、關(guān)節(jié)滑液和關(guān)節(jié)組織基質(zhì)的流變學(xué)特性，緩解滑膜炎癥，減輕軟骨破壞，改善關(guān)節(jié)功能；其主要成分黃酮總甙具有抗炎、鎮(zhèn)痛、消腫的作用，直接對抗炎性介質(zhì)，改善關(guān)節(jié)的內(nèi)環(huán)境，改善微血管狀態(tài)，降低毛細(xì)血管通透性，減少滲出，消除滑膜及周圍組織炎癥，降低細(xì)胞因子、金屬蛋白酶水平，使組織代謝恢復(fù)正常，延緩關(guān)節(jié)軟骨的退變過程。 第二部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關(guān)節(jié)炎模型動物軟骨組織形態(tài)學(xué)的影響，試圖從形態(tài)學(xué)角度闡明雪蓮注射液治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機理．

7、 方法：健康日本大耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C組)和正常組(D組)，每組15只。 結(jié)果：(1)X片觀察：C組與D組相比，關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)問隙明顯變窄，關(guān)節(jié)面粗糙變形，關(guān)節(jié)邊緣有明顯骨贅，軟骨下骨骨密度明顯增高，說明造模成功．(2)光鏡、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，A組動物在各個時間點的軟骨結(jié)構(gòu)、細(xì)胞排列和形態(tài)、軟骨基質(zhì)對Safranin-O異染性均優(yōu)于B、C組。 結(jié)論：(

8、1)從CR平片和光鏡、電鏡觀察比較可以判斷，兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型建立成功．(2)雪蓮注射液能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞合成代謝，促進(jìn)軟骨基質(zhì)蛋白多糖(PG)的合成，對關(guān)節(jié)軟骨具有保護(hù)作用。 第三部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關(guān)節(jié)炎模型動物關(guān)節(jié)液中白介素1水平的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機理。 方法：體內(nèi)試驗：健康日本大耳兔60只，隨機編為4組印雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C組)和正常

9、組(D組)，每組15只。 結(jié)果：雪蓮注射液能夠降低骨關(guān)節(jié)炎模型動物關(guān)節(jié)液與體外培養(yǎng)軟骨細(xì)胞分泌IL-1β的水平。 結(jié)論：雪蓮注射液可以通過抑制白介素-1β的水平對骨關(guān)節(jié)炎起防治作用。 第四部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關(guān)節(jié)炎模型動物軟骨組織膠原表達(dá)的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機理。 方法：健康日本大耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C

10、組)和正常組(D組)，每組15只． 結(jié)果：A組在各時點I型膠原陽染面積低于B組和C組，Ⅱ型膠原陽染面積高于B組和C組．D組在各時點關(guān)節(jié)軟骨僅在表層存在少量I型膠原陽性染色表達(dá)。 結(jié)論：應(yīng)用雪蓮注射液早期干預(yù)在翻譯水平能有效緩解基質(zhì)膠原降解破壞的程度，延緩OA的發(fā)生發(fā)展。 第五部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關(guān)節(jié)炎模型動物關(guān)節(jié)液中透明質(zhì)酸含量的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機理。 方法：健康日本

11、大耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(c組)和正常組(D組)，每組15只． 結(jié)果：雪蓮注射液能夠促進(jìn)骨關(guān)節(jié)炎模型動物關(guān)節(jié)液中透明質(zhì)酸含量的提高． 結(jié)論：雪蓮注射液可以通過提高關(guān)節(jié)液中透明質(zhì)酸的水平對骨關(guān)節(jié)炎起防治作用． 第六部分：目的：探討中藥雪蓮注射液對膝骨性關(guān)節(jié)炎模型動物氧自由基代謝的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機理。 方法：健康日本大

12、耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C組)和正常組(D組)，每組15只． 結(jié)果： (1)除D組以外，各組12周時血清中NO含量均高于6周時；24周時血清中NO含量均高于12周時．NO的表達(dá)均逐漸升高，說明NO是參與膝OA發(fā)病進(jìn)程的重要介質(zhì)，病變的程度越重則含量越高． (2)A組在各時點血清中NO含量均低于B組和C組(P<0.05)，說明雪蓮注射液能有效抑制骨性關(guān)