基于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法篩選天然藥用植物中的乙酰膽堿酯酶抑制劑.pdf

1、酶是治療多種疾病的重要靶標(biāo)，乙酰膽堿酯酶(AChE)的抑制劑是現(xiàn)階段治療阿爾茲海默癥(AD)最有效的一類藥物。從天然產(chǎn)物中尋找適宜患者長期服用、毒副作用小、作用面廣等優(yōu)點(diǎn)的乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChEIs)受到了科研工作者的廣泛關(guān)注。本論文以AChE作為藥物靶標(biāo)，構(gòu)建基于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)的在線生物活性檢測方法，發(fā)展集分離純化、結(jié)構(gòu)確證和活性篩選于一體的活性導(dǎo)向天然產(chǎn)物研究方法，用來尋找和發(fā)現(xiàn)天然藥用植物中潛在

2、的AChEIs候選化合物。
　　本文首先通過影響酶促反應(yīng)的因素和系統(tǒng)儀器參數(shù)的設(shè)定這兩個方面進(jìn)行了反復(fù)的考察和優(yōu)化，確定最適宜的實(shí)驗(yàn)條件。樣品經(jīng)過HPLC分離之后，與AChE和底物反應(yīng)后流入MS進(jìn)行實(shí)時檢測，通過觀察底物的剩余量和產(chǎn)物的生成量的變化來篩選具有AChE抑制活性的化合物。在此基礎(chǔ)上，通過Ellman's法對20種天然藥用植物的醇/水提取物進(jìn)行AChE抑制活性的初步篩選，然后選取其中具有較高AChE抑制活性的對葉百部和河

3、套大黃作為研究對象，并采用在線活性追蹤的結(jié)果為導(dǎo)向，將活性檢測貫穿于分離過程中，成功定位分離3個具有中等AChE抑制活性的化合物，分別是百部新堿(8)、二氫百部新堿(9)和土大黃苷元(16)，其IC50值分別是77.12±1.70、89.51±1.36、77.52±2.41μM。
　　結(jié)果表明，基于HPLC-MS聯(lián)用的在線生物活性檢測方法，不僅為從天然藥用植物中快速尋找和發(fā)現(xiàn)AChEIs候選化合提供了一種新的篩選策略，也為進(jìn)一步開