薄層色譜生物自顯影跟蹤分離天然乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(AD)是造成老年癡呆的最主要原因，是一種進行性和致命性疾病。迄今為止，AD的發(fā)病機制尚未明確，但是在眾多假說中膽堿能學說和β-淀粉樣蛋白學說得到了最廣泛的支持。這兩種學說都表明乙酰膽堿酯酶(AChE)和AD的形成密切相關，會從多個方面加重AD患者的癥狀。目前，抑制AChE活性從而間接增強膽堿能活性仍然是治療AD最有效的方法。植物中含有許多活性好、毒性低的天然AChE抑制劑(AChEI)，為了準確快速的得到活性單體化合物，本

2、文對薄層色譜(TLC)生物自顯影方法在跟蹤分離天然乙酰膽堿酯酶抑制劑方面的應用進行了研究。
　　 首先，對現(xiàn)有的TLC生物自顯影方法進行了改進和優(yōu)化，將所用酶溶液的濃度從原方法中的6.67U/mL降低到1.0U/mL，大大降低了實驗所需費用。酶用量降低后TLC方法的檢測限降低了兩個數(shù)量級，這對發(fā)現(xiàn)植物中微量的AChEI非常有利。此外，對顯色背景等進行了優(yōu)化，使TLC生物自顯影方法更適合于在活性成分跟蹤分離過程中使用，并建立了排除

3、假陽性結果的實驗方法，進一步提高了方法的準確率和結果的可信度。
　　 然后，用改進的TLC生物自顯影方法結合假陽性排除實驗對31種植物提取物進行了抗AChE活性測試，發(fā)現(xiàn)荷葉、獨活、五味子、徐長卿、香附、細辛、白芍很有可能含有天然AChEI。對荷葉總生物堿提取物進一步分離，得到了一種未被報道過的活性較好的天然AChEI，2-羥基-1-甲氧基阿樸啡，其IC50值為5.3±0.4μM。動力學研究表明，2-羥基-1-甲氧基阿樸啡是AC