CAUD啟動(dòng)子的功能分析.pdf

1、該文研究CAUD啟動(dòng)子煙草中的表達(dá)特性,對全長及5'序列部分缺失的啟動(dòng)子的功能進(jìn)行了初步的研究.該研究分為三個(gè)部分:"CAUD啟動(dòng)子的同源序列比較","表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)基因煙草的獲得"以及"CAUD啟動(dòng)子的功能分析".首先經(jīng)過同源序列比較,發(fā)現(xiàn)CAUD啟動(dòng)子與GeneBank庫中的一個(gè)啟動(dòng)子TAZ1有超過97％同源性,推測所克隆到的片段可能是TAZ1或類似啟動(dòng)子.其次在研究中構(gòu)建了含有CAUD系列缺失啟動(dòng)子,NOS終止子以及以Kan為

2、選擇標(biāo)記,以GUS基因?yàn)閳?bào)告基因的系列表達(dá)載體.表達(dá)載體經(jīng)酶切鑒定正確.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草,利用Kan篩選培養(yǎng),獲得40余株Kan抗性苗,獲得PCR檢測陽性植株30余株.對其中15株系進(jìn)行Southern雜交分析,結(jié)果表明CAUD啟動(dòng)子已整合進(jìn)煙草基因組中.論文最后對CAUD啟動(dòng)子的功能進(jìn)行了分析.對各個(gè)構(gòu)建轉(zhuǎn)化的不同株系的植株的各個(gè)器官進(jìn)行GUS染色,發(fā)現(xiàn)除了pRDC-D構(gòu)建轉(zhuǎn)化的株系的花藥均可以染成藍(lán)色,花、莖、葉、根、

3、花瓣、花萼、花絲等均不能染成藍(lán)色.對照植株的花、莖、葉、根、花瓣、花萼、花絲、花藥等均不能染成藍(lán)色.為了明確轉(zhuǎn)基因植株花藥不同時(shí)期GUS基因表達(dá)情況,專門對花藥發(fā)育的各個(gè)時(shí)期進(jìn)行染色,結(jié)果表明此啟動(dòng)子不僅是花藥特異性啟動(dòng)子,還是絨氈層表達(dá)的啟動(dòng)子,具有時(shí)空表達(dá)的特異性.此啟動(dòng)子表達(dá)部位與功能片段的確定對花藥特異性基因的表達(dá)模式研究具有理論意義.可以把此啟動(dòng)子作為基因工程中的一個(gè)有用的表達(dá)調(diào)控元件.如此啟動(dòng)子可用來作為創(chuàng)造雄性不育系的一個(gè)