血漿miRNA-372-373與HBV早期感染的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　目前，在采供血機構(gòu)中進行血液篩查時，乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的E LISA檢測和核酸擴增檢測技術(shù)（NAT）的平行使用已被大范圍推廣，尤其是NAT的使用，在很大程度上縮短了HBV感染的檢測窗口期，提高了輸血的安全性。但受病毒復(fù)制及核酸拷貝數(shù)等因素的影響，NAT也并不能完全杜絕HBV經(jīng)輸血途徑的傳播。microRNA（miRNA）是一類微小的、單鏈的RNA分子，它的長度約為21-25nt，它能夠通過與目標mRNA的3

2、’-UTRs的不完全配對，來調(diào)節(jié)目標mRNA的穩(wěn)定性或抑制其翻譯。人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，miRNAs在血漿中的差異表達與多種疾病密切相關(guān)，而且，它可以在血漿中穩(wěn)定存在，可作為疾病診斷的分子標記物。本文應(yīng)用實時定量 PCR方法檢測HBV早期感染的無償獻血者血漿中和正常獻血者血漿中的miRNAs（miRNA-372/-373）的表達差異，進而分析這兩種miRNA作為HBV早期感染診斷標志物的潛在價值和對獻血者進行HBV篩查的可行性。
　　方法

3、:
　　收集來源于2013年3月至9月間天津市內(nèi)無償獻血者所獻血液的血漿標本留樣，共54份，均經(jīng)過ELISA檢測及核酸檢測，其中ELISA檢測HBsAg及核酸檢測HBV核酸均為陰性的正常的血漿標本18份（正常組）；僅ELISA檢測HBsAg陽性而核酸檢測 HBV核酸陰性的標本18份（E單陽組）；ELISA檢測HBsAg及核酸檢測HBV核酸均為陽性的標本（EN雙陽組）18份（此54份血漿標本的其他常規(guī)血液篩查項目均正常，相應(yīng)的獻血者

4、體檢符合中華人民共和國衛(wèi)生部于2011年12月30日發(fā)布的《獻血者健康檢查要求》，HBsAg陽性的相應(yīng)獻血者均為無明顯癥狀的輕度早期感染者）。提取此3組共54份血漿標本中的miRNA，并用實時定量PCR方法檢測miRNA-372和miRNA-373的相對表達水平。最后，分別比較miRNA-372和miRNA-373在“E單陽組”、“EN雙陽組”的HBV早期感染者與正常獻血者之間的表達差異，并對各組間的miRNA表達趨勢進行統(tǒng)計學(xué)分析；同

5、時，對miRNA-372、miRNA-373的相對表達水平分別與核酸檢測 HBV核酸陽性血漿標本中的HBV DNA拷貝數(shù)進行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)實時定量PCR檢測，與正常獻血者相比，miRNA-372、miRNA-373在“E單陽組”和“EN雙陽組”中均表達上調(diào)，其中，miRNA-372、miRNA-373在“EN雙陽組”中表達上調(diào)更為顯著。進一步分析發(fā)現(xiàn)，在“EN雙陽組”中，miRNA-372、miRNA-37

6、3均與相應(yīng)的HBV DNA拷貝數(shù)呈正相關(guān)性，其中，與miRNA-372相比，miRNA-373與相應(yīng)的HBV DNA拷貝數(shù)的正相關(guān)性更為明顯。
　　結(jié)論:
　　miRNA-372、miRNA-373在HBV早期感染者血漿中的相對表達水平均較正常獻血者上調(diào)，且與相應(yīng)的HBV DNA拷貝數(shù)呈正相關(guān)性。提示miRNA-372、miRNA-373與HBV早期感染密切相關(guān)，在HBV感染的早期診斷中具有潛在應(yīng)用價值，有望為獻血者進行 H