Tim-3基因多態(tài)性與HBV感染轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：乙型肝炎病毒感染是世界范圍的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題之一,HBV感染的轉(zhuǎn)歸和多種臨床表現(xiàn)形式受多種因素的影響。其中除了病毒因素之外還與宿主的免疫功能和遺傳因素密切相關(guān)。HBV感染人體后能否被機(jī)體清除與免疫功能的強(qiáng)弱密切相關(guān)。而在遺傳因素中,已有多個基因的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)被證實(shí)與HBV感染后不同臨床轉(zhuǎn)歸有關(guān)。易感基因的研究有助于弄清慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制,并將可能成為慢型乙型肝炎的診斷、治療和判斷預(yù)后的一個預(yù)測指標(biāo)。慢性乙型肝炎作

2、為一種具有遺傳傾向的多基因傳染性疾病,不同種族、不同地區(qū)乃至不同個體之間遺傳特征均有不同程度的變異。Tim-3基因定位于人類第5號染色體,是Tim基因家族的一個重要成員,其編碼表達(dá)的膜蛋白不表達(dá)于初始T細(xì)胞,而特異性地表達(dá)于活化的Th1細(xì)胞的表面,并且可以作為抑制分子下調(diào)Th1型細(xì)胞反應(yīng),從而導(dǎo)致機(jī)體的免疫監(jiān)視能力的削弱。研究表明Tim-3基因的表達(dá)與許多免疫相關(guān)性疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)聯(lián),研究證實(shí)Tim-3可能在HBV感染的過程中同樣

3、發(fā)揮著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在研究Tim-3基因tagSNP位點(diǎn)基因型和單體型與HBV感染轉(zhuǎn)歸之間的相關(guān)性。
　　目的：分析中國漢族人群T淋巴細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白-3(Tim-3)基因標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性(TagSNP)rs11741184C/G和rs13170556A/G多態(tài)性與HBV感染轉(zhuǎn)歸的關(guān)系。
　　方法：(1)病例選擇和標(biāo)本收集:病例選擇標(biāo)準(zhǔn)為:收集2009年1月至2010年6月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院及第二附屬醫(yī)院

4、感染病科診治的乙型肝炎病毒感染恢復(fù)期患者301例。同時選取慢性乙型肝炎患者996例;兩組患者均排除甲、丙、戊型肝炎病毒和HIV合并感染。對其進(jìn)行病史采集并收集血清標(biāo)本,保存待檢。(2)基因組DNA模板制備:采用QIAGENDNA抽提試劑盒法提取基因組DNA。(3)多態(tài)性位點(diǎn)的選擇及引物設(shè)計:根據(jù)hapmap數(shù)據(jù)庫中漢族人Tim-3基因信息作為tagSNP的標(biāo)準(zhǔn),選擇出Tim-3基因兩個tagSNP位點(diǎn)。檢索(NCBI)公共數(shù)據(jù)庫,用Pr

5、imier3軟件設(shè)計引物及延伸引物。(4)PCR擴(kuò)增:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化后-20℃長期保存。(5)SNaPshot反應(yīng):將獲得的SNaPshot純化產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳,運(yùn)行GeneMapper4.0軟件分析2個SNP的單核苷酸多態(tài)性,計算基因型和等位基因頻率、兩位點(diǎn)間的連鎖不平衡系數(shù)(D’)值及單體型頻率。
　　結(jié)果：Tim-3基因TagSNPrs11741184基因型CC、CG、GG分布頻率在乙型肝炎病毒感染恢復(fù)期患者(研究組)

6、中分布頻率分別為84.39％(254/301)、15.28%(46/301)和0.33%(1/301),慢性乙型肝炎組(對照組)中分布頻率分別為86.04%(857/996)、13.65%(136/996)、0.3%(3/996),兩組P值分別為0.7719、0.4857;Tim-3基因TagSNPrs13170556基因型AA、GA、GG分布頻率在乙型肝炎病毒感染恢復(fù)期患者中分別為68.77%(207/301)、28.57%(86/3

7、01)和2.66%(8/301),慢性乙型肝炎組(對照組)中分布頻率分別為68.07%(678/996)、28.41%(283/996)和3.51%(35/996),兩組P值分別為0.7673、0.6603。中國漢族人群中Tim-3基因SNP位點(diǎn)存在3種單體型(C-A、C-G、G-A),其分布頻率在研究組分別為75.08%,16.94%和7.97%,對照組分別為75.15%,17.72%和7.13%,兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.0