CathepsinB在P2X7受體激活NALP3中的作用研究.pdf

1、目的：檢測(cè)三磷酸腺苷（ATP）及P2X7受體拮抗劑KN-62、組織蛋白酶B拮抗劑CA-074Me處理人單核細(xì)胞THP-1后P2X7受體、組織蛋白酶B（CTSB）與NALP3的表達(dá)，探討P2X7受體、CTSB及NALP3的相互關(guān)系以及P2X7受體影響NALP3表達(dá)的可能機(jī)制。
　　方法：
　　(1)常規(guī)培養(yǎng)THP-1單核細(xì)胞，MTT法檢測(cè)不同濃度ATP處理后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，選擇模擬炎癥狀態(tài)下細(xì)胞反應(yīng)的最適ATP濃度。
　

2、　(2)分別用ATP單獨(dú)處理THP-1細(xì)胞， P2X7受體拮抗劑KN-62或CTSB拮抗劑CA-074Me和ATP共同處理單核細(xì)胞THP-1，用實(shí)時(shí)定量PCR、流式細(xì)胞術(shù)FCM、蛋白印跡法Western blotting分別檢測(cè)P2X7受體、CTSB、NALP3基因和蛋白表達(dá)的變化，探討P2X7受體影響NALP3表達(dá)的可能機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　(1)ATP作用于THP-1細(xì)胞后，細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制，模擬炎癥狀態(tài)下細(xì)胞反應(yīng)的

3、最適ATP濃度為2mM。
　　（2）用ATP處理后，P2X7、NALP3、CTSB mRNA及蛋白的表達(dá)均明顯高于空白對(duì)照組。
　?。?）用P2X7受體的拮抗劑KN-62和ATP共同處理細(xì)胞后，P2X7受體、NALP3、CTSB mRNA及蛋白的表達(dá)較ATP組均顯著下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　（4）用CTSB的拮抗劑CA-074Me和ATP共同處理THP-1細(xì)胞后，NALP3及CTSB mRNA及蛋白的表達(dá)較ATP組均顯

4、著下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P2X7 mRNA及蛋白的表達(dá)與ATP組相比無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論：在2mM的ATP刺激下，P2X7受體、CTSB、NALP3的表達(dá)均明顯升高， P2X7的活化引起CTSB、NALP3的表達(dá)上調(diào)，而抑制P2X7的表達(dá)導(dǎo)致CTSB、NALP3的表達(dá)減少，說(shuō)明P2X7受體對(duì)CTSB、NALP3炎癥小體的表達(dá)有影響；抑制CTSB的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致NALP3的表達(dá)受到抑制，而對(duì)P2X7受體的表達(dá)幾乎無(wú)影響，說(shuō)明CTSB對(duì)N