P2X7受體在葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎發(fā)病中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　炎癥性腸病( Inflammatory bowel disease,IBD)是一類(lèi)原因不明的腸道慢性炎癥性疾病。大多數(shù)研究認(rèn)為IBD發(fā)病機(jī)制可能與遺傳易感患者在腸腔內(nèi)抗原誘導(dǎo)下免疫反應(yīng)過(guò)度激活引起的。在炎癥情況下,ATP釋放增加,與免疫細(xì)胞膜P2X7受體結(jié)合,促使NLRP3炎性體重新組裝,激活caspase-1,促進(jìn)多種炎癥因子的成熟與釋放,從而誘導(dǎo)炎癥性疾病的發(fā)病,如呼吸性疾病、神經(jīng)性疾病、風(fēng)濕性疾病及腎臟性疾病。然

2、而,P2X7受體在炎癥性腸病發(fā)病的作用尚待研究。
　　目的:
　　探討P2X7受體在葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎發(fā)病中的作用及機(jī)制。
　　方法:
　　將BALB/C小鼠隨機(jī)分成4組:正常對(duì)照組,DSS+Suramin(P2X7受體抑制劑)組,DSS組,DSS+BzATP(P2X7受體激動(dòng)劑)組。復(fù)制急性DSS結(jié)腸炎模型,小鼠自由飲用4％DSS7天后改飲用蒸餾水2天后處死;飲用DSS第4天開(kāi)始,DSS+B

3、zATP組、DSS+Suramin組分別每天給予BzATP1mg、Suramin1mg腹腔注射至第8天。每天觀察各組小鼠體重變化、腹瀉及有無(wú)血便等情況來(lái)評(píng)估疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI),造模結(jié)束后取結(jié)腸組織行HE染色評(píng)估結(jié)腸炎嚴(yán)重程度。檢測(cè)各組炎癥腸段中MPO含量,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)腸中CD68及caspase-1 p10在粘膜固有層細(xì)胞中的表達(dá),ELISA法檢測(cè)TNF及IL-1β含量。結(jié)果:
　　1. DAI評(píng)分:第10天正常對(duì)照組

4、小鼠的 DAI評(píng)分均為0。DSS組為8.25±2.25, DSS+BzATP組為9.4±0.55,這兩組比 DSS+Suramin組明顯升高(p<0.05)。
　　2.組織學(xué)評(píng)分:DSS+Suramin組小鼠的組織學(xué)評(píng)分為3.63±0.74,與DSS組(8.25±1.58)、DSS+BzATP組(9.2±2.17)相比明顯降低(p<0.05),但明顯高于正常對(duì)照組(p<0.05)。
　　3.結(jié)腸勻漿MPO活性:DSS+Sur

5、amin組小鼠的MPO活性為0.33±0.06 U/g,與DSS組(0.49±0.07U/g)、DSS+BzATP組(0.54±0.10U/g)相比均有明顯差異(p<0.05),但與正常組(0.23±0.03 U/g)相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　4.組織勻漿TNF含量:DSS+Suramin組為163.68±24.51 pg/ml,明顯低于DSS組(281.35±30.33 pg/ml)、DSS+BzATP組(305.

6、48±65.16 pg/ml)(p<0.05),但較正常組(126.18±23.24 pg/ml)增高(p<0.05)。
　　5.組織勻漿IL-1β含量:DSS+Suramin組為85.88±12.17 pg/ml,明顯低于DSS組(146.21±27.99 pg/ml)、DSS+BzATP組(197.60±41.80 pg/ml)(p<0.05),但較正常對(duì)照組無(wú)明顯增高(67.38±9.36 pg/ml)(p>0.05)。

7、r>　　6.結(jié)腸組織CD68的表達(dá):DSS+Suramin組結(jié)腸組織CD68陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于DSS組及DSS+BzATP組(p<0.05),但較正常對(duì)照組增高(p<0.05)。
　　7.結(jié)腸組織caspase-1 p10的表達(dá):DSS+Suramin組結(jié)腸組織caspase-1 p10陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于DSS組及DSS+BzATP組(p<0.05),但較正常對(duì)照組增高(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　P2X7受體在