非諾貝特和吡格列酮對(duì)脂肪甘油三酯脂酶的調(diào)控及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分非諾貝特和吡格列酮對(duì)肥胖大鼠脂肪甘油三酯脂酶表達(dá)的影響
　　 目的：脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride Lipase，ATGL)是水解甘油三酯(Triglyceride，TG)的關(guān)鍵酶。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，改善各組織的脂代謝可以有效增加胰島素的敏感性。然而ATGL在脂肪、肝臟、肌肉三大胰島素作用的靶組織中的調(diào)控尚未闡明。非諾貝特和吡格列酮分別對(duì)脂代謝和胰島素敏感性有較強(qiáng)的作用。本研究通過高脂喂養(yǎng)形成肥胖

2、胰島素抵抗大鼠模型，并用非諾貝特和吡格列酮治療肥胖大鼠。
　　 探討：
　　 1.高脂喂養(yǎng)大鼠脂肪、肝臟、肌肉三大組織中TG的變化，以及ATGL在這三大代謝組織中的變化。
　　 2.非諾貝特和吡格列酮治療肥胖大鼠后脂肪、肝臟、肌肉三大組織中TG的變化，以及這三大代謝組織ATGL的表達(dá)的調(diào)控作用。
　　 材料與方法：
　　 32只雄性SD大鼠隨機(jī)分為2組，普食對(duì)照組(NC)和高脂飲食組(HFD)。喂

3、養(yǎng)8周后，HFD組再隨機(jī)分為高脂對(duì)照組(HFD-UT)、非諾貝特治療組(HFD-FT)、吡格列酮治療組(HFD-PT)，每組8只大鼠，治療4周。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后行口服糖耐量試驗(yàn)(OGTT)和胰島素耐量試驗(yàn)(ITT)檢測(cè)大鼠糖耐量和胰島素敏感性，取空腹血清檢測(cè)血糖、肝功能、血脂和胰島素等。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠，取脂肪、肝臟稱重，計(jì)算脂體比和肝體比；庚烷-異丙醇-吐溫抽提法檢測(cè)脂肪、肝臟、肌肉組織中TG的含量；Western blot方法檢測(cè)脂

4、肪、肝臟和肌肉組織ATGL蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.HFD-UT組大鼠糖耐量受損，出現(xiàn)胰島素抵抗。
　　 2.HFD-UT組大鼠血脂紊亂，脂體比增加，脂肪、肝臟、肌肉組織中的TG含量均明顯增加(P<0.01)。
　　 3.HFD-UT組大鼠脂肪、肝臟和肌肉組織中ATGL分別較NC組降低50％、70％、40％，均顯著低于NC組。
　　 4.HFD-FT組和HFD-PT組大鼠胰島素抵抗

5、和糖耐量較HFD-UT組改善。
　　 5.HFD-FT組和HFD-PT組大鼠脂體比、肝體比均明顯下降(P<0.01)；HFD-FT組脂肪、肝臟、肌肉中TG的含量分別較HFD-UT組下降了45％、38％、59％；HFD-PT組脂肪、肝臟、肌肉中TG的含量分別較HFD-UT組下降了55％、31％、48％。
　　 6.大鼠脂肪、肝臟、肌肉ATGL蛋白在HFD-FT組較HFD-UT組分別增高40％、40％、1倍；HFD-PT組A

6、TGL表達(dá)在脂肪、肝臟、肌肉分別上升90％、50％、40％，但HFD-FT和HFD-PT組ATGL水平較NC組無顯著差異。
　　 小結(jié)：
　　 1.高脂飲食誘發(fā)大鼠糖耐量異常和胰島素抵抗。
　　 2.肥胖大鼠脂肪組織增多，肝臟、肌肉組織出現(xiàn)脂肪沉積，同時(shí)組織中ATGL的表達(dá)下降。
　　 3.非諾貝特和吡格列酮改善肥胖大鼠的胰島素抵抗。
　　 4.非諾貝特和吡格列酮降低脂肪含量，減輕肝臟、肌肉TG的

7、蓄積，改善ATGL在脂肪、肝臟、肌肉組織的表達(dá)。
　　 第二部分非諾貝特和吡格列酮對(duì)HepG2和C2C12細(xì)胞脂肪甘油三酯脂酶表達(dá)的影響
　　 目的：
　　 觀察棕櫚酸對(duì)HepG2和C2C12細(xì)胞中ATGL表達(dá)的影響，并探討非諾貝特和吡格列酮對(duì)ATGL的調(diào)控作用。
　　 材料與方法：
　　 HepG2、C2C12細(xì)胞在含有10％FBS和1％P/S的DMEM培養(yǎng)液，37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)，取對(duì)

8、數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。C2C12細(xì)胞分化為成熟肌細(xì)胞。根據(jù)不同處理方法設(shè)立對(duì)照組(CON)、棕櫚酸(PA)處理組、非諾貝特+棕櫚酸(Feno+PA)處理組、吡格列酮+棕櫚酸(Piog+PA)處理組，處理24小時(shí)后收集細(xì)胞，RT-PCR和western blot方法檢測(cè)HepG2、C2C12細(xì)胞ATGL蛋白或ATGL mRNA的表達(dá)，比較4組細(xì)胞中ATGL表達(dá)的差異。
　　 結(jié)果：
　　 PA處理后，HepG2、C2C12

9、細(xì)胞中ATGL蛋白的表達(dá)分別是CON組的40％、60％，C2C12細(xì)胞中ATGL mRNA的表達(dá)下降了60％，下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HepG2細(xì)胞中Feno+PA和Piog+PA組ATGL的表達(dá)較PA組分別增加了1.2倍、70％；在C2C12細(xì)胞，F(xiàn)eno+PA和Piog+PA組ATGL的蛋白表達(dá)較PA組分別增加了1倍、80％，ATGL mRNA表達(dá)分別上升了90％、30％。
　　 小結(jié)：
　　 棕櫚酸抑制HepG2和C2C

10、12細(xì)胞ATGL的表達(dá)；非諾貝特或吡格列酮逆轉(zhuǎn)棕櫚酸對(duì)ATGL的抑制作用。
　　 第三部分 APPL1介導(dǎo)棕櫚酸對(duì)脂肪甘油三酯脂酶的調(diào)控
　　 目的：
　　 APPL1是參與脂肪酸氧化的重要信號(hào)分子，其對(duì)TG水解的作用目前還不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過在C2C12細(xì)胞中抑制APPL1的表達(dá)，觀察APPL1是否參與棕櫚酸對(duì)ATGL的調(diào)控過程。
　　 材料與方法：
　　 1.構(gòu)建APPL1 siRNA質(zhì)粒，建立

11、穩(wěn)定的APPL1-suppressed C2C12細(xì)胞。
　　 2.在含有10％FBS的DMEM培養(yǎng)液、37℃、5％C02條件下培養(yǎng)，并將C2C12細(xì)胞分化為成熟肌細(xì)胞。
　　 3.分別用棕櫚酸(PA)、非諾貝特和棕櫚酸(Feno+PA)、吡格列酮和棕櫚酸(Piog+PA)處理2種細(xì)胞，設(shè)立對(duì)照組(CON)，24小時(shí)后收集細(xì)胞。
　　 4.RT-PCR和western blot方法檢測(cè)APPL1-suppress

12、ed C2C12和Scrambledcontrol C2C12細(xì)胞中ATGL的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 Scrambled control C2C12細(xì)胞中，PA組ATGL蛋白和ATGLmRNA的表達(dá)均較CON組明顯下降(P<0.01)，F(xiàn)eno+PA和Piog+PA組ATGL蛋白和ATGLmRNA的表達(dá)又較PA組明顯上升(P<0.01或P<0.05)；APPL1-suppressedC2C12細(xì)胞中4組處理組中A

13、TGL的表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 小結(jié)：
　　 APPL1介導(dǎo)了棕櫚酸對(duì)ATGL表達(dá)的下調(diào)作用。
　　 結(jié)論：
　　 1.肥胖大鼠脂肪增多，TG在肝臟、肌肉異位沉積，脂肪、肝臟、肌肉ATGL表達(dá)下降。
　　 2.棕櫚酸抑制HepG2、C2C12細(xì)胞中ATGL的表達(dá)。
　　 3.非諾貝特和吡格列酮改善肥胖大鼠肝臟、肌肉的脂質(zhì)沉積，并改善ATGL在脂肪、肝臟、肌肉中的表達(dá)。