RRSV介導(dǎo)水稻產(chǎn)生矮縮分蘗增多的癥狀分析.pdf

1、水稻齒葉矮縮病毒（rice ragged stunt virus, RRSV），屬呼腸孤病毒科(Reoviridae)，水稻病毒屬(Oryzavirus)，經(jīng)褐飛虱傳播從而引起水稻鋸齒葉矮縮。近年來(lái)，在福建、廣東、江西等地均有發(fā)病，不同年份農(nóng)田發(fā)病率可達(dá)80﹪以上。該病害一旦爆發(fā)，將嚴(yán)重影響我國(guó)水稻產(chǎn)量。矮縮（dwarf）、分蘗增多（tillering/branching），是水稻齒葉矮縮病的顯著特征之一。miRNA是植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中

2、重要的調(diào)控因子，現(xiàn)有研究表明 miR156基因家族極其所調(diào)控的靶基因參與了水稻農(nóng)藝性狀的形成，包括植株的高矮和分蘗等。因此，本文運(yùn)用水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系、RNAi技術(shù)、熒光定量PCR和酵母雙雜交技術(shù)來(lái)研究水稻miR156靶基因OsSPL，探索RRSV引起水稻矮縮及分蘗數(shù)增減的分子機(jī)制，得到結(jié)果如下：
　　1.使用熒光定量 PCR技術(shù)對(duì)不同時(shí)間段 RRSV病株和健康水稻中 miR156靶基因的mRNA表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明感病水稻

3、中OsSPL3、OsSPL4、OsSPL12、OsSPL14基因表達(dá)量有顯著的下調(diào)，分別為健康水稻的0.37倍、0.41倍、0.2倍和0.3倍。
　　2.由于OsSPL14一直沒(méi)有擴(kuò)增獲得，本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了OsSPL3、OsSPL4、OsSPL12的過(guò)表達(dá)載體和OsSPL3、OsSPL4、OsSPL12的RNAi載體，通過(guò)水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系獲得了轉(zhuǎn)基因水稻株系。分析轉(zhuǎn)基因水稻發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性O(shè)sSPL3、OsSPL4的RNAi轉(zhuǎn)基因植株和Os

4、SPL3、OsSPL4過(guò)量表達(dá)植株與野生型無(wú)明顯差異，陽(yáng)性O(shè)sSPL12過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻表現(xiàn)出莖桿細(xì)長(zhǎng)且分蘗數(shù)少于野生型水稻，其高度與陰性水稻植株相比無(wú)顯著變化，陽(yáng)性 OsSPL12的RNAi轉(zhuǎn)基因水稻植株較陰性水稻出現(xiàn)一定程度的矮縮表型。
　　3.采用酵母雙雜交技術(shù)分析得到OsSPL3、OsSPL4及OsSPL12都沒(méi)有與RRSV有互作關(guān)系。據(jù)此推測(cè) RRSV與這幾個(gè)靶基因沒(méi)有直接的作用，推測(cè)其產(chǎn)生的表型可能是與靶基因上游的mi