重組納豆激酶研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文利用PCR方法從納豆枯草桿菌(Bacillus subtilis/natto BZ22)基因組DNA中擴(kuò)增出納豆激酶基因(NK),將該基因克隆到克隆載體pMD18-T上,獲得重組質(zhì)粒pMD18-T/NK并進(jìn)行測序,結(jié)果表明:NK基因由831個核苷酸組成,共編碼276個氨基酸,其中不含內(nèi)含子.利用EXPASY tools、PdbWiewer及RasMol2.6對NK核苷酸序列及氨基酸序列進(jìn)行基因改造,并進(jìn)行預(yù)測分析.共設(shè)計突變16個

2、密碼子以降低其自由能,預(yù)測突變了2個位置的氨基酸,目的是引入一個二硫鍵增加納豆激酶的穩(wěn)定性同時提高納豆激酶的纖溶活性.將pMD18-T/NK以及表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K分別用EcoR I和Not I雙酶切,連接獲得重組載體pPIC9K/NK,并將其轉(zhuǎn)化至巴斯德畢赤酵母GS115中,獲得重組酵母菌Gs115/NK.培養(yǎng)重組酵母菌Gs115/NK,用甲醇誘導(dǎo)使表達(dá)產(chǎn)物分泌到胞外.并用纖維蛋白平板法測定納豆激酶活性.結(jié)果表明,纖溶活性良好.對表達(dá)

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