硫化氫在休克腸淋巴液介導心肌生理特性異常中的作用與機制.pdf

1、背景:硫化氫(hydrogen sulfide，H2S)是新近發(fā)現(xiàn)的第三個氣體信使分子，具有多種重要的心血管調(diào)節(jié)效應。在失血性休克大鼠模型上發(fā)現(xiàn)，大鼠平均動脈壓(mean artery pressure，MAP)和心率下降過程中伴隨著血漿及肝臟中H2S含量增加和肝臟胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE) mRNA表達增加，表明H2S參與了休克心功能低下的發(fā)生。項目組前期研究發(fā)現(xiàn)，阻斷失血-脂多糖二次打擊

2、或失血性休克時腸淋巴液回流，可降低心肌組織的炎癥反應、減輕自由基損傷，減少組織細胞凋亡、抑制中性粒細胞扣押及細胞膜泵功能障礙，從而減輕心肌損傷;引流腸淋巴液可提高休克大鼠的MAP，減輕心肌損傷，改善能量代謝;同時，休克腸淋巴液引流可提高大鼠心室乳頭肌的收縮力，提高左室內(nèi)壓，提示休克腸淋巴液具有降低心肌電生理特性的作用。
　　 目的:為了進一步闡明H2S是否參與了休克腸淋巴液介導的心肌生理特性異常這一過程，本研究復制失血性休克大鼠

3、模型，觀察休克腸淋巴液引流對大鼠血清和心肌H2S含量、心功能、心肌電生理特性的影響;應用H2S抑制劑(胱硫醚-γ-裂解酶的不可逆抑制劑DL-propargylglycine，PPG)或不同濃度外源性H2S、KATp通道阻斷劑格列本脲、L-型鈣通道開放劑Bay K8644分別與淋巴液引流組或回流組的離體心室乳頭肌共孵育，觀察H2S在休克腸淋巴液降低心肌電生理特性中的作用與機制;將引流的休克淋巴液與正常大鼠乳頭肌孵育，應用H2S抑制劑，觀察

4、心肌電生理特性的變化。
　　 方法:Wistar雄性大鼠18只，隨機均分為假手術組、休克組、休克腸淋巴液引流組（休克+引流組）。所有大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉肌肉注射麻醉后，行股部手術，右股靜脈注射肝素鈉全身抗凝，右股動脈插管連接生物信號采集系統(tǒng)，連續(xù)監(jiān)測MAP;左側股動脈插管后連接注射器固定于抽注機上備放血用。然后行腹部手術，剝離腸系膜淋巴管。待所有手術完成、穩(wěn)定30min后，休克組與引流組大鼠經(jīng)左股動脈勻速放血，10 min內(nèi)將MAP

5、降至40mmHg，復制失血性休克模型。假手術組大鼠進行相同的手術操作，但不放血。記錄MAP。引流組大鼠維持低血壓1h后，行腸系膜淋巴管插管，引流休克腸淋巴液至休克3h;休克組維持低血壓3h、引流組引流休克3h腸淋巴液后、假手術組在相應時間點，均經(jīng)頸動脈逆行插管至左心室，檢測反映心功能的指標（左室收縮內(nèi)壓LVDP、左室舒張末壓LVEDP、左心室內(nèi)壓最大變化速率±dp/dt max）;分別在各時間點從股動脈放血2ml，檢測血清硫化氫濃度。同

6、時，分別在各相應時間點留取左心室乳頭肌，一根用于檢測組織中硫化氫濃度，另一根用于標準微電極細胞內(nèi)記錄技術引導動作電位，觀察指標:靜息電位(resting potential，RP)、超射值(over-shoot，OS)、動作電位幅值(amplitude of action po-tential，APA)、0相最大除極速率(maximal rate of depolarization，Vmax)、復極20％、50％和90％時間(20％、5

7、0％and90％ of duration of action potential, APD20、APD50and APD90)、復極化平均速度（average rate of repolarization）、及去極化時程(duration of depolarization)。
　　 結果:
　　 1.休克時大鼠血漿和乳頭肌組織中H2S含量明顯增加(P＜0.05，P＜0.01);淋巴液引流可以降低休克大鼠血漿和乳頭肌組織

8、中H2S含量(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 2.休克時大鼠左心室心功能指標顯著下降(P＜0.01)。淋巴液引流可以明顯改善休克大鼠左心室心功能(P＜0.05)。
　　 3.休克大鼠左心室乳頭肌APA、OS、Vmax、最大復極速度、復極化平均速度均顯著下降（P＜0.01），去極化時程、APD20、APD50、APD90明顯延長(P＜0.01)。淋巴液引流可以明顯改善以上電生理指標(P＜0.01)。
　　 4

9、.PPG可使離體的正?；蛐菘舜笫笕轭^肌，APD20、APD50、APD90明顯延長(P＜0.01);最大復極速度、復極化平均速度均顯著減慢（P＜0.05）。
　　 5.H2S可使離體的正?；蛐菘舜笫笕轭^肌，APA、OS、Vmax顯著下降(P＜0.05，P＜0.01)，APD20、APD50、APD90明顯縮短(P＜0.05，P＜0.01);最大復極速度、復極化平均速度均顯著加快(P＜0.05，P＜0.01)。應用KATP通道阻斷

10、劑格列苯脲（Gli;20μmol/L）和L-型鈣通道開放劑Bay K8644（0.5μmol/L），均可部分地阻斷H2S對乳頭肌細胞的電生理效應。
　　 結論:
　　 1.失血性休克引起了心肌電生理特性異常和心功能下降，阻斷休克腸淋巴液回流可改善心肌電生理特性和心功能。
　　 2.血漿和心肌中內(nèi)源性H2S參與了失血性休克心肌電生理特性異常和心功能下降的病理生理過程，阻斷休克腸淋巴液回流改善了心肌電生理特性和心功能