微生物轉(zhuǎn)化法制備普瑞巴林手性中間體.pdf

1、普瑞巴林(Pregabalin)，(S)-3-氨甲基-5-甲基己酸，是一種用于抗神經(jīng)痛和癲癇癥的輔助治療的手性藥物，其國際市場需求呈現(xiàn)較快增長之勢。開展生物催化法制備普瑞巴林的研究，篩選拆分制備普瑞巴林的微生物，具有重要的應(yīng)用前景和價值。
　　 (S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯((S)-CCMAE)是合成普瑞巴林的關(guān)鍵手性中間體．本文首先以外消旋體2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CCMAE)為底物，從土壤中

2、篩選得到一株具有自主知識產(chǎn)權(quán)的能夠?qū)τ尺x擇性水解(R)-CCMAE的假單胞菌(Pseudomonas)CGMCC No.4184。對其產(chǎn)酶條件及培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，使酶活從15.92 U/L提高到33.43 U/L。隨后對假單胞菌CGMCC No.4184靜息細(xì)胞水解拆分底物的反應(yīng)條件進(jìn)行了研究，確定了較優(yōu)反應(yīng)條件為：30～35℃， pH7.5～8.5。并成功利用微生物靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化法制備了ee值達(dá)99.8％的(S)-CCMAE，這與目前報(bào)

3、道的生物拆分工藝均有所不同。研究還發(fā)現(xiàn)Tween-80和TritonX-100可明顯提高對映選擇率E值和酶活。最后利用海藻酸鈉-PVA復(fù)合載體法制備了假單胞菌CGMCC No.4184的固定化細(xì)胞，對其技術(shù)參數(shù)和反應(yīng)條件作了優(yōu)化，并利用所制得的固定化細(xì)胞制備ee值99％以上的(S)-CCMAE．該固定化細(xì)胞能夠較好地進(jìn)行重復(fù)利用，
　　 本研究中篩選獲得的高選擇性R型水解酶可能是一種新酶，后續(xù)的基因克隆和表達(dá)、酶學(xué)性質(zhì)研究工作正