腸道病毒71型3D核酸聚合酶的結構生物學研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、手足口病是一類主要由小RNA病毒科腸道病毒屬病毒引起的傳染病,主要感染對象是嬰幼兒,Enterovirus71(EV71)與Coxsackievirus A16(CVA16)是引起手足口病的兩個最主要病原體。在2009年1月至2011年5月期間,我國發(fā)現(xiàn)的由EV71流行引起的感染病例超過了200萬,其中約有1000人死亡。并且EV71的感染者常常會產生神經系統(tǒng)疾病,而CVA16導致的手足口病則不會有嚴重的并發(fā)癥。所以,針對EV71的研究

2、備受人們關注。
　　 EV71病毒為單股正鏈RNA病毒,基因組約有7.5kb。該基因組編碼一個約250kDa的多聚蛋白,這個多聚蛋白被自身產生的2A蛋白酶(2Apro)和3C蛋白酶(3Cpro)切割,產生11個成熟的結構蛋白和非結構蛋白。其中以RNA為模板的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRp),即水解后所產生的3Dpol,主要負責病毒的復制,是抗病毒藥物設計的主要靶點之一。
　

3、　 解析出3Dpol的結構,再根據(jù)結構特征篩選出特異性的抑制劑,對防治手足口病具有重要意義。我們將3Dpol構建在了實驗室改造的含有TEV蛋白酶酶切位點的pGEX-4T-1上來表達蛋白,并通過GST親和層析、離子交換和分子篩純化獲得了較純的蛋白。在篩選了大約1800個結晶條件并對有效條件進行了進一步優(yōu)化后,獲得了衍射結果較好的蛋白晶體。通過在上海同步輻射光源(SSRF)的衍射實驗,我們獲得的3Dpokl分辨率達到了2.4(A)。這對基

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