鼠疫血清抗體蛋白譜的研究.pdf

1、[背景] 鼠疫作為一種烈性傳染病，至今人們對其的致病因素、發(fā)病機制還不能夠完全了解。盡管現(xiàn)在已經(jīng)有很多種鼠疫疫苗，但是這些疫苗對肺型鼠疫的免疫保護作用并不是很理想?；贔1和V抗原的基礎(chǔ)上，加入其他的具有免疫保護作用成分的多亞單位疫苗將是未來鼠疫疫苗研究的一個方向。對自然環(huán)境下感染的患者和EV76疫苗攻擊的人群體內(nèi)血清抗體譜進行研究將為更好的了解鼠疫的致病機制，尋找新的亞單位疫苗成分提供線索。蛋白芯片技術(shù)是近年來發(fā)展起來的能夠同時研究多

2、個抗原—抗體、蛋白—蛋白相互作用的高通量技術(shù)，它具有大規(guī)模、高通量、敏感性高、所需樣本少等特點。 [方法] 挑選出149個鼠疫菌已知的或者推測的與毒力相關(guān)蛋白的基因與表達載體PET32a連接在大腸桿菌BL21（DE3）中表達，利用表達的目的蛋白氨基酸端帶有6×His標(biāo)簽與Ni—NTA具有親和的原理，通過96孔板對蛋白進行高通量純化。純化的蛋白點在醛基化玻片上制備蛋白芯片。通過與鼠疫患者血清、EV76疫苗株免疫人群的血清反應(yīng)，檢測

3、不同血清中抗體升高的種類和趨勢。 [結(jié)果] 本實驗中共有116個蛋白表現(xiàn)為有意義。通過分析鼠疫患者和EV76疫苗株免疫人群的血清抗體譜，共有57個蛋白在所有的血清中檢測到相應(yīng)的抗體。鼠疫患者中一部分來自于云南省家鼠疫源地的腺型鼠疫，一部分來自于野鼠疫源地的肺型鼠疫。其中只在腺型鼠疫患者體內(nèi)YPCD1.41，YPMT1.50Ac，YPO2100，YPO2117，YPO2135，YPO2315，YPO2321，YPO2944，YPO

4、3015，YPO3616，YPO3754，YPPCP1.08c，12個蛋白可以產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。而肺型鼠疫所特有的共10個蛋白可以產(chǎn)生相應(yīng)的抗體即 YPCD1.38c，YCD1.37c，YPO1860，rv10，YPMT1.05c，YMT1.46c，YPMT1.74，YPMT1023，YPO2134，YPO3516.其中在自然感染的人群中共有8個蛋白始終存在，并且這些蛋白所產(chǎn)生的抗體升高幅度大，所以可以作為下一階段鼠疫疫苗研究的重點，研究