結(jié)核患者血清IgG抗體適體的制備及其檢測(cè)血清結(jié)核抗體的研究.pdf

1、目的：篩選獲得結(jié)核患者血清IgG抗體的特異性適體，研究結(jié)核患者IgG抗體適體組合及適體與抗原組合在結(jié)核病血清學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：純化結(jié)核患者血清中的IgG抗體，以IgG抗體為靶標(biāo)，利用SELEX技術(shù)進(jìn)行篩選，篩選得到的ssDNA適體文庫，進(jìn)行克隆測(cè)序、親和性檢測(cè)、二級(jí)構(gòu)象分析，鑒定單獨(dú)適體、兩適體組合及適體和抗原組合的檢測(cè)效果，均進(jìn)行了88份血清標(biāo)本的分析，然后將適體組合與抗原初步組合進(jìn)行221份血清標(biāo)本的分析。<

2、br>　　 結(jié)果：純化獲得了IgG抗體，濃度為1.8mg/ml。SELEX篩選12輪后，隨機(jī)挑選12個(gè)適體進(jìn)行二級(jí)結(jié)構(gòu)分析和親和性檢測(cè)。二級(jí)構(gòu)象分析揭示，適體與靶分子的結(jié)合基礎(chǔ)為口袋頸環(huán)鼓包結(jié)構(gòu)和分枝的連接角度。SELEX篩選得到4個(gè)較高親和性適體。單適體88份血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，適體之間存在交叉互補(bǔ)性。適體兩兩組合88份血清學(xué)檢測(cè)效果顯示，N1+N6組合的疊加作用較好且陽性平均值與陰性平均值的比值(P/N)較高。N6適體、16KD抗

3、原以及N6+16KD（1:1比例組合）3種檢測(cè)方法，88份血清標(biāo)本檢測(cè)的特異性均為100％，敏感性分別為：47.92%、56.25%、64.58%，非參數(shù)檢驗(yàn)顯示,3種檢測(cè)體系的結(jié)核病組和健康對(duì)照組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，卡方檢驗(yàn)三種檢測(cè)方法之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。選擇適體之間疊加作用較好且P/N值較高的N1+N6與16KD抗原的初步組合，221份血清標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果顯示了相同的結(jié)果，即卡方檢驗(yàn)三種檢測(cè)方法