尖頂羊肚菌胞外多糖提取物抗氧化和延緩衰老的作用研究.pdf

1、本論文選擇尖頂羊肚菌為實(shí)驗(yàn)材料，以深層發(fā)酵獲取尖頂羊肚菌胞外多糖提取物，通過體外抗氧化實(shí)驗(yàn)、果蠅壽命實(shí)驗(yàn)和小鼠生理、生化實(shí)驗(yàn)來探究其抗衰老功效，并制成了功能性健康食品-尖頂羊肚菌胞外多糖顆粒和膠囊制劑，發(fā)現(xiàn)這兩種食品具有良好的延緩衰老作用。具體實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果如下：
　　 1.尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的制備：采用化學(xué)合成培養(yǎng)基從液體培養(yǎng)發(fā)酵尖頂羊肚菌兩種不同菌株（尖頂羊肚菌M-2和尖頂羊肚菌M-1），將發(fā)酵液濃縮、去蛋白、乙醇沉淀

2、、真空冷凍干燥，獲得尖頂羊肚菌胞外多糖提取物MCEE-1和MCEE-2。
　　 2.體外抗氧化實(shí)驗(yàn)：以Vc為陽性對照，并對尖頂羊肚菌抑制ABTS自由基、對羥基自由基以及對超氧陰離子的作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)評價其體外抗氧化活性。結(jié)果表明：抑制不同種自由基所需的多糖濃度有差別。2mg/mL的MCEE-1和MCEE-2對超氧陰離子的抑制率分別為45.81％、43.06％；1mg/mL的MCEE-1和MCEE-2對羥基自由基的抑制率

3、分別為60.98％、72.4％；0.1mg/mL的MCEE-1和MCEE-2對ABTS自由基的抑制率可達(dá)58.79％、77.43％。尖頂羊肚菌胞外多糖對·OH和O2-·和ABTS+自由基均具有抑制作用，而且成一定的量效關(guān)系，總體效果是Vc的抑制作用最強(qiáng)，MCEE-2比MCEE-1的抑制作用稍強(qiáng)。
　　 3.果蠅壽命實(shí)驗(yàn)：用劑量分別為0.2g/L、1g/L、5g/L和25g/L的胞外多糖提取物作為果蠅的飼料添加物，其中復(fù)合多糖中單

4、糖的比例為1:1即MCEE-1：MCEE-2以1:1的比例混合。結(jié)果表明：尖頂羊肚菌胞外多糖提取物可明顯延長果蠅的壽命。0.2g/L的MCEE-1可使雌、雄果蠅的壽命分別延長13.45％和24.58％，使雌雄果蠅的最高壽命分別延長了20.87％和34.07％，但隨著濃度的升高會不同程度地縮短果蠅的壽命。0.2g/L的MCEE-2能顯著延長雌雄果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時間和最高壽命（P<0.01），起到較好的延緩衰老作用。0.2g/L的復(fù)

5、合多糖能使雄性果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡時間和最高壽命都延長，但不存在顯著性差異。這提示MCEE-2比MCEE-1的延壽效果好，經(jīng)實(shí)驗(yàn)篩選后以MCEE-2做小鼠生理試驗(yàn)。此外，雌雄果蠅對尖頂羊肚菌胞外多糖提取物的反應(yīng)存在性別差異，對雄性果蠅延壽效果比對雌性果蠅的好。
　　 4.小鼠生理生化實(shí)驗(yàn)：通過注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型，分別用50mg/kg·d、200 mg/kg·d、800mg/kg·d的MCEE-2灌胃衰老模型小鼠，

6、測定小鼠的臟器指標(biāo)和對小鼠腦組織中的SOD活性，LF含量及MDA含量的影響。結(jié)果表明：實(shí)驗(yàn)42天后發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，模型組小鼠出現(xiàn)衰老特征，腦組織中的SOD活性下降、LF含量和MDA含量增加，其肝臟組織出現(xiàn)病變現(xiàn)象，造模比較可靠。三個劑量組的MCEE-2能顯著降低衰老小鼠腦組織中的LF含量和MDA含量，但中、高劑量組的MCEE-2對衰老小鼠腦組織中的SOD活性影響效果不大明顯，低劑量組的MCEE-2能使雄性、雌性小鼠腦的SOD活性分別

7、提高20.70％、21.13％。這提示MCEE-2具有良好的延緩衰老作用。
　　 5.在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上研制出MCEE-2的功能性健康食品一顆粒沖劑和膠囊制劑，再將此產(chǎn)品進(jìn)行小鼠延緩衰老實(shí)驗(yàn)，顆粒試驗(yàn)組的濃度分別為1962mg/kg·d、654 mg/kg·d；膠囊試驗(yàn)組的濃度分別為165 mg/kg·d、55 mg/kg·d（分別相當(dāng)于含150mg/kg·d、50mg/kg·d的MCEE-2）。結(jié)果表明：此顆粒劑中MCEE-2

8、的含量為3.81％，MCEE-2顆粒劑為乳白色，多糖顆粒的直徑約為0.9mm，顆粒大小均勻，在水中溶解性好，溶液澄清透明，無焦屑等雜質(zhì)，甜味適中；此膠囊中MCEE-2含量為45.32％，MCEE-2膠囊內(nèi)充物為淡黃色，選用0號膠囊，裝量為0.265g，少量不溶于水。小鼠生理實(shí)驗(yàn)表明：尖頂羊肚菌胞外多糖顆粒和尖頂羊肚菌胞外多糖膠囊對雄性衰老小鼠血清中的SOD和GSH-Px活力的增加效果較為明顯，降低雌性腦組織中MDA含量的較為明顯。其中，

9、654 mg/kg·d的顆粒沖劑使雄性小鼠血清中的SOD、GSH-Px含量分別提高了60.71％（P<0.01）和66.62％（P<0.01），使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量降低了32.67％（P<0.01）；165mg/kg·d和55mg/kg·d的多糖膠囊可顯著增加雄性小鼠血清中的SOD、GSH-Px含量（P<0.01），使雌性衰老小鼠腦組織中的MDA含量分別降低了27.58％（P<0.01）和34.29％（P<0.01）。