姬菇SS-01胞外多糖及胞內(nèi)鋅多糖的提取和抗氧化活性.pdf

1、姬菇(Pleurotus cornucopiae)，又名黃白側(cè)耳、紫孢側(cè)耳、小平菇，屬于真菌門(Eumycophyta)，擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)，層菌綱(Hymenomycetes)，傘菌目(Agaricales)，側(cè)耳科(Pleurotaceae)，側(cè)耳屬(Pleurotus)，是一種低溫型食用菌。富含多種生物活性物質(zhì)，姬菇多糖在抗氧化、增強(qiáng)免疫力等方面有重要作用。
　　 鋅是人體內(nèi)的必需微量元素之一，作

2、為多種酶的重要組分，在人體的生長(zhǎng)發(fā)育、認(rèn)知記憶以及保持細(xì)胞的完整性和蛋白質(zhì)核酸的生物合成等過程中發(fā)揮及其重要的作用。我國的膳食結(jié)構(gòu)屬于低鋅水平，而且鋅在人體內(nèi)不能合成，必需從外界攝入。
　　 本課題以姬菇SS-01為出發(fā)菌株，進(jìn)行了姬菇富鋅培養(yǎng)，通過Plackett-Burman(PB)試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)(response surface methodology，RSM)等方法優(yōu)化了姬菇胞外多糖(exopolysaccharide

3、，EPS)和胞內(nèi)鋅多糖(intracellular zinc polysaccharide，IZPS)的提取條件，并對(duì)EPS和IZPS進(jìn)行了體外和體內(nèi)抗氧化活性檢測(cè)，得到結(jié)論如下：
　　 (1)結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)濃度的無機(jī)鋅鹽能促進(jìn)菌絲生長(zhǎng)，但高濃度的鋅對(duì)菌絲體的生長(zhǎng)有抑制作用。通過比較姬菇的生物量，確定了培養(yǎng)基中最適的鋅源為醋酸鋅，最適的添加濃度為150mg/L，最大生物量達(dá)到8.821g/L，比不富鋅培養(yǎng)的高167

4、.38％，最大富鋅率達(dá)97.87％。
　　 (2)EPS最佳提取條件
　　 RSM實(shí)驗(yàn)表明，EPS的最佳提取條件為乙醇濃度86.97％，pH8.99，濃縮倍數(shù)2.43，在此條件下，EPS的理論提取值為3.96g/L?？紤]到實(shí)際的操作性，將提取條件調(diào)整為乙醇濃度85％，pH9，濃縮倍數(shù)2，此條件下，EPS的理論提取值為3.69g/L，而實(shí)際提取值為3.68g/L，稍低于理論值。
　　 (3)IZPS最佳提取條件

5、r>　　 RSM結(jié)果表明，IZPS的最佳提取條件為加水倍數(shù)20.44，提取時(shí)間2.97h，乙醇濃度84.76％，在此條件下，IZPS的理論提取值為5.09％?？紤]到實(shí)際的操作性，將提取條件改為加水倍數(shù)20,提取時(shí)間3h。乙醇濃度85％，在此條件下，IZPS的理論提取值為5.10％，而實(shí)際提取值為5.11％，與模型預(yù)測(cè)值相符。
　　 (4)EPS和IZPS的體外抗氧化活性
　　 以超氧陰離子(O2-·)、羥基自由基(·O

6、H)、二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)和還原力為指標(biāo)，對(duì)姬菇EPS和IZPS的體外抗氧化能力進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，姬菇的EPS和IZPS對(duì)上述自由基都有較好的清除作用，其中IZPS對(duì)自由基的清除率明顯高于EPS和胞內(nèi)多糖(intracellular polysaccharide，IPS)。在還原力方面，IZPS也明顯高于EPS和IPS。
　　 (5)EPS和IZPS的體內(nèi)抗氧化活性
　　 通過測(cè)定小鼠心、肝、脾、腎及全血

7、中抗氧化酶及脂質(zhì)過氧化物的含量，觀察了多糖對(duì)機(jī)體各組織及全血抗氧化能力的影響。結(jié)果表明，多糖能明顯提高各組織及全血中谷胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidsade，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化氫酶(catalase，CAT)等抗氧化酶的活性，同時(shí)能顯著降低體內(nèi)丙二醛(malondialdehyde，MDA)和脂質(zhì)過氧化物(lipid peroxidation

8、，LPO)的含量，提高了機(jī)體抗活性氧的能力，防止和減輕脂質(zhì)的過氧化損傷。隨著EPS濃度的增加，小鼠各組織及全血中SOD、GSH-Px及CAT活性升高，MDA及LPO含量降低；當(dāng)飼喂同等濃度的多糖溶液時(shí)，IZPS組中SOD、GSH-Px及CAT明顯高于IPS組，IZPS組的MDA及LPO含量明顯低于IPS組。
　　 (6)IZPS和IPS的分離純化
　　 分別對(duì)IZPS和IPS進(jìn)行DEAE-纖維素柱層析，各自得到三種不同組