黑脈羊肚菌多酚提取物抗氧化及抗增殖活性研究.pdf

1、本文以黑脈羊肚菌（Morchella angusticepes Peck）原料（以下以羊肚菌表示），對(duì)其進(jìn)行體外模擬消化，分析消化過(guò)程中多酚及ORAC（oxygen radical absorbance capacity, ORAC）的變化情況，以人肝癌細(xì)胞HepG2、人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2細(xì)胞為模型，對(duì)羊肚菌經(jīng)體外模擬消化處理后的細(xì)胞毒性及抗增殖活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用細(xì)胞抗氧化活性（cellular antioxidant activi

2、ty, CAA）方法，以HepG2細(xì)胞為模型，從細(xì)胞水平上對(duì)羊肚菌經(jīng)體外模擬消化處理后的細(xì)胞抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為羊肚菌功能活性及營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值研究提供參考。以有機(jī)溶劑（丙酮）萃取、大孔吸附樹(shù)脂純化后的羊肚菌游離酚提取物孵育HepG2細(xì)胞和Caco-2細(xì)胞，對(duì)羊肚菌游離酚提取物的抗增殖作用進(jìn)行評(píng)價(jià)，另外，通過(guò)測(cè)定羊肚菌游離酚提取物的細(xì)胞抗氧化活性、抗增殖活性及細(xì)胞內(nèi)抗氧化、抗增殖相關(guān)酶和蛋白含量進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)一步明確羊肚菌游離酚提取物抗氧化

3、、抗增殖作用機(jī)制。主要結(jié)論如下：
　?。?）體外模擬胃、腸消化對(duì)有利于羊肚菌多酚的釋放及ORAC；細(xì)胞抗增殖活性結(jié)果表明：體外模擬胃消化處理不能明顯抑制HepG2細(xì)胞增殖，腸消化處理對(duì)HepG2細(xì)胞有較強(qiáng)的抑制作用；對(duì)Caco-2細(xì)胞而言，除胃酸組、胃空白組外，胃0 h、胃液組、腸液組和腸空白組對(duì) Caco-2細(xì)胞的增殖均有較強(qiáng)的抑制作用；CAA結(jié)果顯示，體外模擬胃消化處理的樣品表現(xiàn)出促氧化作用，體外模擬腸消化處理的樣品表現(xiàn)出抗氧

4、化作用，并且抗氧化作用隨著樣品濃度的增大而增大；并且腸液0.5 h的CAA值（52.32±7.61μmol QE/g DW）強(qiáng)于腸空白0.5 h的CAA值（32.06±3.05μmol QE/g DW）。
　?。?）羊肚菌游離酚提取物、結(jié)合酚提取物存在細(xì)胞抗氧化作用，其 CAA值分別為26.60±5.35μmol QE/g DW、15.03±2.15μmol QE/g DW，且羊肚菌游離酚提取物、結(jié)合酚提取物的抗氧化活性存在一定的

5、劑量效應(yīng)，即隨著羊肚菌游離酚提取物、結(jié)合酚提取物濃度的增大，其抗氧化活性越明顯；其抗氧化作用可能與Nrf2-Keap1-ARE抗氧化信號(hào)通路有關(guān)，具體表現(xiàn)為：促進(jìn)Nrf2蛋白的表達(dá)，使其進(jìn)入細(xì)胞核啟動(dòng)ARE下游Ⅱ相解毒酶和細(xì)胞保護(hù)性蛋白基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而發(fā)揮抗氧化作用，保護(hù)細(xì)胞正常功能。
　?。?）羊肚菌游離酚提取物可以有效的抑制HepG2細(xì)胞、Caco-2細(xì)胞的增殖，并且表現(xiàn)出明顯的濃度劑量效應(yīng)，即，隨著羊肚菌游離酚提取物濃度的增大

6、，其對(duì) HepG2細(xì)胞、Caco-2細(xì)胞增殖的抑制作用越明顯，且羊肚菌游離酚提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用優(yōu)于對(duì)Caco-2細(xì)胞的增殖抑制作用；而羊肚菌結(jié)合酚提取物的抗增殖作用不明顯。
　?。?）羊肚菌游離酚酚提取物抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制可能和p38/MAPK信號(hào)通路有關(guān)，具體表現(xiàn)為：促進(jìn)肝癌細(xì)胞HepG2內(nèi)p21、p-ASK1、p-p38蛋白的表達(dá)，抑制p-p53、CDK4、Cyclin D1、PCNA、TR