線粒體基因組COⅠ基因變異與2型糖尿病的相關(guān)研究.pdf

1、目的： 1. 研究中國(guó)浙江漢族2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)人群中線粒體基因組COI基因變異與T2DM的關(guān)系. 2. 探討線粒體基因組COI基因變異與T2DM臨床特征和并發(fā)癥的關(guān)系. 方法： 1. 隨機(jī)選擇214例來(lái)自中國(guó)浙江無(wú)血緣關(guān)系確診為T(mén)2DM的患者和146例口服糖耐量正常無(wú)糖尿病家族史的健康對(duì)照者作為研究對(duì)象. 2. 提取研究對(duì)象的外周血總DNA,

2、設(shè)計(jì)三對(duì)引物,通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增線粒體DNA,純化PCR產(chǎn)物,對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序,利用片段重疊群拼接線粒體COI基因,與線粒體基因劍橋參考序列(Cambrige reference sequence,CRS)比對(duì)找出線粒體COI基因的核苷酸變異位點(diǎn). 3. 分析T2DM組COI基因變異位點(diǎn),并比較T2DM組與正常對(duì)照組各個(gè)變異位點(diǎn)的發(fā)生率,探討COI基因變異與T2DM的關(guān)系. 4. 將T2DM患者分成有錯(cuò)義變異組和無(wú)錯(cuò)

3、義變異組,分析兩組間的主要臨床資料得出CO I基因變異與T2DM臨床特征的相關(guān)性. 5. 對(duì)T2DM組發(fā)生COI基因變異的病例分別按照有無(wú)視網(wǎng)膜病變、周圍神經(jīng)病變、腎病和高血壓進(jìn)行分組,探討COI基因變異與T2DM并發(fā)癥的關(guān)系. 結(jié)果： 1. 與線粒體基因劍橋參考序列比對(duì),T2DM患者及健康對(duì)照者線粒體CO I基因均存在大量變異.214例T2DM患者中共檢出68個(gè)變異,其中31個(gè)在線粒體數(shù)據(jù)庫(kù)、V、Vw.mito

4、map.0rg已經(jīng)報(bào)道過(guò);12個(gè)錯(cuò)義變異;6個(gè)變異(G626lA、C6340T,G6570T、T6681C、T7389C和G7419A)所編碼氨基酸的極性及酶亞單位二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變;5個(gè)錯(cuò)義變異(A6098G、G6261A、C6340T、G6570T和T6681C)位于CO Ⅰ基因的進(jìn)化保守區(qū)域.146例健康對(duì)照者中亦檢出56個(gè)變異.其中27個(gè)變異同時(shí)存在于T2DM組及正常對(duì)照組.所有CO Ⅰ基因變異在172DM組與正常對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 2.C7028T變異率最高,214例T2DM組中檢出208例,檢出率為97.2﹪,146例正常對(duì)照組中檢出145例,檢出率為99.3﹪,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);C7196A和G6962A在T2DM組和正常對(duì)照組的檢出率均大于5﹪,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 3.分析線粒體CO Ⅰ基因錯(cuò)義變異與T2DM臨床表現(xiàn)的關(guān)系.有錯(cuò)義變異組中有家族史的比率比無(wú)錯(cuò)義變異組高;有

6、錯(cuò)義變異組中總膽固醇(TC)比無(wú)錯(cuò)義變異組高;有錯(cuò)義變異組中高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)較無(wú)錯(cuò)義變異組低,上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05). 4.把T2DM組檢測(cè)到的CO Ⅰ基因變異結(jié)合并發(fā)癥分析.T6253C在并發(fā)視網(wǎng)膜病變組出現(xiàn)4例,在無(wú)視網(wǎng)膜病變組只有1例;G6026A在并發(fā)周圍神經(jīng)病變組出現(xiàn)4例,無(wú)周圍神經(jīng)病變組未檢出;C6164T和A6254G兩者總是合并出現(xiàn)在有周圍神經(jīng)病變組和有腎病組,在無(wú)周圍神經(jīng)病變組和

7、無(wú)腎病組未檢出;C6531T在并發(fā)腎病組檢出3例,無(wú)腎病組只檢出1例;上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).所有CO Ⅰ基因變異在有高血壓組和無(wú)高血壓組的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 5.按并發(fā)癥分組分析各組間主要臨床資料的差異.T2DM并發(fā)視網(wǎng)膜病變組的平均發(fā)病年齡較無(wú)視網(wǎng)膜病變組小;T2DM并發(fā)視網(wǎng)膜病變組依賴胰島素治療的比率比無(wú)視網(wǎng)膜病變組高;T2DM并發(fā)視網(wǎng)膜病變組合并周圍神經(jīng)病變和腎病的比率比無(wú)視網(wǎng)膜病變組

8、高.T2DM并發(fā)周圍神經(jīng)病變組依賴胰島素治療的比率比無(wú)周圍神經(jīng)病變組高;T2DM并發(fā)周圍神經(jīng)病變組合并視網(wǎng)膜病變的比率比無(wú)周圍神經(jīng)病變組高.T2DM并發(fā)腎病組的平均發(fā)病年齡較無(wú)腎病組小;T2DM并發(fā)腎病組依賴胰島素治療的比率比無(wú)腎病組高;T2DM并發(fā)腎病組總膽固醇(TC)比無(wú)腎病組高;T2DM并發(fā)腎病組合并視網(wǎng)膜病變的比率比無(wú)腎病組高;上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).按T2DM有無(wú)并發(fā)高血壓分組時(shí),除年齡和平均體重指數(shù)在兩組間差

9、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其它主要臨床資料差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 結(jié)論： 1.浙江漢族T2DM人群線粒體COⅠ基因存在大量變異,其中,G6261A、C6340T、 G6570T和T6681C可能與T2DM的發(fā)生發(fā)展相關(guān). 2.線粒體COⅠ基因變異與T2DM的臨床表現(xiàn)密切相關(guān),在診治T2DM時(shí)需注意對(duì)伴G5985A、A6040G、A6052G、A6098G、T6253C、G6261A、C6340T、 G6570T、T6681

10、C、T7270C、T7389C和G7419A線粒體CO I基因變異的T2DM者盡早進(jìn)行家族遺傳史的排查及動(dòng)脈粥樣硬化的防治. 3.線粒體COⅠ基因變異與T2DM的并發(fā)癥密切相關(guān),T6253C、G6026A、 C6531T、C6164T和A6254G可成為T(mén)2DM合并微血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)報(bào). 4.浙江漢族人群較常見(jiàn)的線粒體COⅠ基因多態(tài)性變異有C7028T、C7196A和 G6962A.線粒體COⅠ基因nt7028堿基T可