氧化應(yīng)激與線粒體基因突變型糖尿病及2型糖尿病并發(fā)癥相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：糖尿病逐漸成為我國突出的社會(huì)問題，深入研究糖尿病的發(fā)病機(jī)制和有效的預(yù)防措施是當(dāng)務(wù)之急。氧化應(yīng)激作為導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥四條途徑的共同通路，最近又與線粒體功能障礙及糖尿病發(fā)生密切相關(guān)。線粒體基因突變引起ATP合成障礙，呼吸鏈功能異常，加重氧化應(yīng)激，線粒體基因突變導(dǎo)致嚴(yán)重的氧化應(yīng)激可能與線粒體糖尿病特殊的臨床表型相關(guān)。本研究測定了線粒體糖尿病、2型糖尿病和健康人氧化應(yīng)激標(biāo)志物及紅細(xì)胞內(nèi)ATP等核苷酸代謝水平，探討氧化應(yīng)激與線粒體基因突變的

2、關(guān)系，同時(shí)評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激，ATP含量與糖尿病一些臨床特點(diǎn)及其并發(fā)癥發(fā)生的關(guān)系。 方法：選取16例線粒體糖尿病患者(mtDM組，經(jīng)PCR產(chǎn)物直接測序診斷)，根據(jù)mtDNA突變位點(diǎn)的不同，分為mtDNAtRNAA3243G亞組(7例)和ND4A12026G亞組(9例)。隨機(jī)選取我院就診130例2型糖尿病患者，從中抽取與mtDM組在年齡、性別相匹配的64例(1∶4)T2DM組(不含上述mtDNA突變)。選取與mtDM組在年齡、性別相匹配

3、的健康人Normal組32例(不含上述mtDM突變)，收集其臨床資料： 1)取其清晨空腹靜脈抗凝血，以常規(guī)蛋白酶K快速裂解法提取外周血白細(xì)胞基因組DNA。用PCR-RFLP在T2DM組和Normal組篩查并排除攜帶A3243G和A12026G突變對(duì)象； 2)應(yīng)用相關(guān)試劑盒測定全部受試對(duì)象外周全血SOD、GSH-Px、CAT、MDA及抗ROS活力； 3)用高效液相色譜法測定各組紅細(xì)胞中ATP、ADP、AMP的含量。

4、 4)用相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：1.mtDM組較Normal組SOD、GSH-Px、CAT活性、抗ROS力下降，MDA含量升高，mtDM組較T2DM組CAT活性下降，MDA含量升高。T2DM組較Normal組抗氧化酶活性均降低，MDA含量高于Normal組。mtDM組中mtDNAA3243G亞組和A12026G亞組之間各氧化應(yīng)激標(biāo)志物均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.應(yīng)用HPLC法檢測紅細(xì)胞ATP、A

5、DP、AMP含量，所有樣品均有較好的分離效果。mtDM組與正常組比較，ATP含量及ATP/ADP下降，ADP及AMP含量升高；與T2DM組比較，ATP含量及ATP/ADP下降，AMP含量升高，ADP無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。T2DM組與Normal組比較ATP含量和ATP/ADP顯著下降，ADP及AMP含量升高。mtDNAA3243G亞組與A12026G亞組間腺苷酸水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在T2DM患者中發(fā)現(xiàn)ATP含量與紅細(xì)胞內(nèi)SOD活性及SOD/MDA

6、正相關(guān)，ATP/ADP與GSH-Px活性正相關(guān)。 3.氧化應(yīng)激與2型糖尿病并發(fā)癥。SOD及CAT活性下降是糖尿病合并周圍神經(jīng)病變、視網(wǎng)膜病變的危險(xiǎn)因素。在合并有糖尿病視網(wǎng)膜病變的患者，MDA含量升高。CAT活性下降是糖尿病腎病的危險(xiǎn)因素。紅細(xì)胞ATP含量是糖尿病合并冠心病的危險(xiǎn)因素。而氧化應(yīng)激指標(biāo)均未發(fā)現(xiàn)與大血管并發(fā)癥包括高血壓、冠心病、雙下肢動(dòng)脈硬化癥相關(guān)。 4.氧化應(yīng)激與糖尿病臨床生化特點(diǎn)。MDA含量與糖尿病患者血漿

7、UA含量呈正相關(guān)，在合并有高尿酸血癥的患者M(jìn)DA水平升高。在超重的糖尿病患者M(jìn)DA含量升高，SOD、GSH-Px活性有下降的趨勢。在Normal組胰島素抵抗指標(biāo)HOMA-IR與MDA含量顯著相關(guān)。在Normal組和T2DM均出現(xiàn)SOD活性隨年齡增長而降低，MDA含量隨年齡增長而升高，在老年糖尿病患者體內(nèi)氧化應(yīng)激較正常老年人更嚴(yán)重，而在糖尿病患者不同年齡組MDA沒有差異。 結(jié)論：糖尿病時(shí)外周血氧化應(yīng)激增加，紅細(xì)胞中ATP含量顯著下