Sansalvamide A衍生物H-10對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的增殖及端粒酶活性的影響.pdf

1、研究背景:Sansalvamide A(簡(jiǎn)稱SanA)是從海洋真菌（梭霉菌屬）中分離出的一種環(huán)肽類物質(zhì)，具有顯著的抗腫瘤能力。
　　目的:研究Sansalvamide A衍生物H-10對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)增殖以及端粒酶調(diào)控的影響。探討不同濃度的H-10對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系的形態(tài)，生長(zhǎng)及其對(duì)端粒酶活性表達(dá)的影響，并且從基因和蛋白水平初步探討其凋亡作用機(jī)制，為臨床治療乳腺癌提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、>　　方法:
　　1將不同濃度的San A衍生物H-10(01020406080μM)與這兩種乳腺癌細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。
　　2采用MTT比色法檢測(cè)不同濃度的SanA衍生物H-10(01020406080μ M)作用24h后，對(duì)人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞）生長(zhǎng)增殖及活力的抑制作用。
　　3采用生長(zhǎng)曲線的方法檢測(cè)40μM H-10作用于人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7

3、細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞）后，對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。
　　4采用劃痕試驗(yàn)檢測(cè)40μM San A衍生物H-10作用于人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)0h，6h，12h，24h后，對(duì)這兩種細(xì)胞遷徙轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　5端粒酶重復(fù)序列擴(kuò)增法TRAP-PCR檢測(cè)不同處理濃度的San A衍生物H-10（01020406080μM）對(duì)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)端粒酶活性的影

4、響。
　　6采用流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry, FCM)檢測(cè)40μM San A衍生物H-10作用于人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)24h后，對(duì)細(xì)胞凋亡率以及細(xì)胞周期分布的影響。
　　7 RT-PCR法檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)在不同濃度的San A衍生物H-10(01020406080μM)處理24h后，對(duì)c-Myc，Bcl-2，hTERT基因表達(dá)的影響

5、。
　　8免疫印跡技術(shù)(Western blot)檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞)在不同濃度的San A衍生物H-10處理下，c-Myc，Bcl-2，hTERT蛋白表達(dá)的差異和變化。
　　結(jié)果:
　　1隨著SanA衍生物H-10藥物濃度的增加，細(xì)胞開始出現(xiàn)皺縮，變圓，脫落，體積變小等形態(tài)學(xué)方面的改變，并且可見凋亡小體。而對(duì)照組細(xì)胞大小均勻，生長(zhǎng)密集。
　　2 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，San

6、A衍生物H-10對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖具有顯著地抑制作用，并且存在濃度依賴性，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231經(jīng)40μ M SanA衍生物H-10作用后，生長(zhǎng)增殖能力降低，且明顯低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231經(jīng)40μM SanA衍生物H-10作用后，細(xì)胞的遷

7、移速度減慢，且明顯低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。
　　5 SanA衍生物H-10對(duì)這兩種乳腺癌細(xì)胞的端粒酶活性都有抑制作用，且隨著藥物濃度的增加活性水平逐漸減弱，呈劑量依賴性減少，并且對(duì)雌激素陽性的MCF-7細(xì)胞的作用更加明顯(p＜0.05)。
　　6流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，401μ M的SanA衍生物H-10作用于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-23124h后，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡峰，S期細(xì)胞增加，G

8、0/G1和G2/M期的細(xì)胞減少(p＜0.05)。
　　7 RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著SanA衍生物H-10藥物濃度的增加，這兩種人乳腺癌細(xì)胞的c-Myc，Bcl-2 mRNA水平穩(wěn)定下降，且hTERTmRNA的表達(dá)水平也有所下降。與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　8 Western blot結(jié)果顯示，San A衍生物H-10能下調(diào)hTERT,c-Myc，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平顯著降低(p＜0.05