原蛋白轉(zhuǎn)變酶2基因上調(diào)對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究背景：
　　在《黃帝內(nèi)經(jīng)·九針論篇》中,“四時八風(fēng)之客于經(jīng)絡(luò)之中,為瘤病也”提出正氣不足六淫外邪停留經(jīng)絡(luò)而成瘤病的病機(jī),乳腺腫瘤多因肝經(jīng)不通、正氣不足外邪侵襲所致。乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤,美國臨床醫(yī)師癌癥雜志公布的最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,美國2011年有230480例女性患乳腺癌,占女性新發(fā)惡性腫瘤30％。我國北京、上海、天津等大城市的統(tǒng)計顯示,乳腺癌同樣是我國女性最常見的惡性腫瘤,且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。近年的研究發(fā)現(xiàn)

2、,乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與內(nèi)分泌肽直接相關(guān)。神經(jīng)內(nèi)分泌肽是機(jī)體內(nèi)分泌、旁分泌或自分泌等器官或活細(xì)胞分泌的活性多肽,這些多肽的成熟需要9種原蛋白轉(zhuǎn)變酶(Pro-protein Convertases,PCs)的互相協(xié)同作用,在時間和空間上加工神經(jīng)內(nèi)分泌肽前體蛋白(原蛋白)在特定組織和細(xì)胞中的成熟。原蛋白轉(zhuǎn)變酶2基因(pc2)是細(xì)胞的正?；?PC2酶介導(dǎo)的加工體系在乳腺癌中呈現(xiàn)低水平,這種變化與腫瘤形成、發(fā)展和凋亡等密切相關(guān)。本研究通過上調(diào)pc

3、2基因表達(dá),研究乳腺癌細(xì)胞的增殖狀態(tài)。
　　研究目的：
　　研究pc2基因上調(diào)對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響,為乳腺癌的治療提供新的研究方向。
　　研究方法：
　　自大鼠垂體組織中提取RNA,經(jīng)過RT-PCR、重組載體轉(zhuǎn)化和篩選等手段,結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳對重組的pc2和7b2基因進(jìn)行鑒定。通過質(zhì)粒抽提試劑盒(小量)和離子交換柱(大量),將重組的基因提取并純化。用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因制劑,將基因?qū)氚┘?xì)胞。用Western b

4、lot技術(shù)分析PC2蛋白的表達(dá)。通過MTT法和熒光免疫等體外實驗分析pc2基因?qū)Π┘?xì)胞增殖的作用。通過pc2基因制劑的Exvivo和Invivo小鼠體內(nèi)實驗,評價癌細(xì)胞在體內(nèi)的增殖。
　　研究結(jié)果：
　　本研究在成功構(gòu)建重組pc2和7b2基因的基礎(chǔ)上,利用脂質(zhì)體介導(dǎo)技術(shù)將pc2基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入癌細(xì)胞。Western blot的結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染了pc2和7b2基因的4T1細(xì)胞,其蛋白的表達(dá)量比野生型4T1細(xì)胞的表達(dá)量高。這說明了基因

5、成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞中。MTT的體外抑制實驗結(jié)果顯示,隨著pc2和7b2基因轉(zhuǎn)染的量的增加,癌細(xì)胞的增殖受到抑制。在免疫熒光的實驗中,轉(zhuǎn)染了pc2和7b2基因的細(xì)胞其細(xì)胞核破碎,而野生型的細(xì)胞細(xì)胞核保持圓形。在小鼠體內(nèi)注射轉(zhuǎn)染了基因的癌細(xì)胞后,對照組的7只老鼠都長了腫瘤,而pc2和7b2組的小鼠只有一只長出了腫瘤。對荷瘤小鼠體內(nèi)進(jìn)行基因治療時,pc2和7b2組的腫瘤其生長受到抑制,而對照組的腫瘤隨著時間的推移而增長。
　　結(jié)論：