端粒酶反義RNA與bcl-2核酶對肝癌細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文端粒酶反義RNA與bcl-2核酶對肝癌細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響姓名：張傳山申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：王文亮2000.5.1第四軍醫(yī)大掌博士掌位論文·中文摘·j }也可引起多種基因的表達(dá)水平發(fā)生改變，如T G F o ．／E G F l 3 、P 1 6 、P 2 1 、B a x等。我們的婆驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，端粒酶的活性表達(dá)在肝癌的發(fā)病過程中有重要意義。在肝癌發(fā)病

2、的多階段過程中，端粒．端粒酶與其他各種因素間的相互作用與影響，最終導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。采用反義技術(shù)作為“基因封條”能夠特異性封閉或抑制端粒酶的活性表達(dá)，并導(dǎo)致細(xì)胞端粒D N A 序列長度不能維持．破壞了染色體的穩(wěn)定性，重新激活細(xì)胞衰老途徑，啟動細(xì)胞凋亡進(jìn)程：同時(shí)，抑制端粒酶的活性表達(dá)，還有可能對肝癌細(xì)胞的侵襲性轉(zhuǎn)移產(chǎn)生一定的抑制作用。f 由此可見，通過抑制細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)來達(dá)到治療肝癌的目的，具有潛在的l 臨床實(shí)際應(yīng)用前景。B c l ．

3、2 作為細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控蛋白之一，可以抑制多種因素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。同時(shí)，B d ．2 的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的耐藥性有關(guān)。因此，B c l —2 也成為克服并逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性作用的靶目標(biāo)。核酶較其他反義技術(shù)，在疾病的治療發(fā)面具有更多的優(yōu)越性。為此．J 我們也觀察了b c l 一2 核酶對肝癌細(xì)胞系S M M C 7 7 2 l 細(xì)胞的作用。研究發(fā)現(xiàn)，B c l 一2 在S M M C 7 7 2 1 細(xì)胞中有一定的表達(dá)。借助脂質(zhì)體轉(zhuǎn)移的方

4、法．將可誘導(dǎo)性b c l ．2 真核表達(dá)載體導(dǎo)入S M M C 7 7 2 1細(xì)胞中。經(jīng)z n 2 + 誘導(dǎo)b c l ．2 核酶表達(dá)后。采用免疫組化方法未能檢測出細(xì)胞中有B c l 一2 蛋白表達(dá)。說明b c l ．2 核酶可有效的抑制b c l ．2 的表達(dá)；T R A P —P C R ．E L I S A 法檢測細(xì)胞端粒酶活性，吸光度( A 一一A m ) 值為l5 3 0 。說明b c ] 一2 核酶對細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)有一定

5、的抑制作用．從而證實(shí)B c l 一2 對細(xì)胞端粒酶活性有一定的調(diào)節(jié)作用。在b c l ．2 核酶抑制b c l ．2 表達(dá)、降低細(xì)胞端粒酶活性的同時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。經(jīng)流式細(xì)胞儀測定，在細(xì)胞周期G 1 期前有凋亡峰出現(xiàn)．凋亡細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的3 ．1 ％，形態(tài)學(xué)觀察也得出相同的結(jié)論。但相對于人反義端粒酶R N A 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用要低。j 此外，我們還發(fā)現(xiàn)，b c l ．2 核酶在抑制細(xì)胞端粒酶活性表達(dá)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時(shí)，也可引起