端粒酶反義RNA與bcl-2核酶對肝癌細胞端粒酶活性表達及細胞凋亡的影響.pdf

1、第四軍醫(yī)大學博士學位論文端粒酶反義RNA與bcl-2核酶對肝癌細胞端粒酶活性表達及細胞凋亡的影響姓名：張傳山申請學位級別：博士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：王文亮2000.5.1第四軍醫(yī)大掌博士掌位論文·中文摘·j }也可引起多種基因的表達水平發(fā)生改變，如T G F o ．／E G F l 3 、P 1 6 、P 2 1 、B a x等。我們的婆驗結果證實，端粒酶的活性表達在肝癌的發(fā)病過程中有重要意義。在肝癌發(fā)病

2、的多階段過程中，端粒．端粒酶與其他各種因素間的相互作用與影響，最終導致肝癌的發(fā)生。采用反義技術作為“基因封條”能夠特異性封閉或抑制端粒酶的活性表達，并導致細胞端粒D N A 序列長度不能維持．破壞了染色體的穩(wěn)定性，重新激活細胞衰老途徑，啟動細胞凋亡進程：同時，抑制端粒酶的活性表達，還有可能對肝癌細胞的侵襲性轉移產生一定的抑制作用。f 由此可見，通過抑制細胞端粒酶活性表達來達到治療肝癌的目的，具有潛在的l 臨床實際應用前景。B c l ．

3、2 作為細胞凋亡的重要調控蛋白之一，可以抑制多種因素誘導的細胞凋亡。同時，B d ．2 的表達與腫瘤細胞的耐藥性有關。因此，B c l —2 也成為克服并逆轉腫瘤細胞耐藥性作用的靶目標。核酶較其他反義技術，在疾病的治療發(fā)面具有更多的優(yōu)越性。為此．J 我們也觀察了b c l 一2 核酶對肝癌細胞系S M M C 7 7 2 l 細胞的作用。研究發(fā)現，B c l 一2 在S M M C 7 7 2 1 細胞中有一定的表達。借助脂質體轉移的方

4、法．將可誘導性b c l ．2 真核表達載體導入S M M C 7 7 2 1細胞中。經z n 2 + 誘導b c l ．2 核酶表達后。采用免疫組化方法未能檢測出細胞中有B c l 一2 蛋白表達。說明b c l ．2 核酶可有效的抑制b c l ．2 的表達；T R A P —P C R ．E L I S A 法檢測細胞端粒酶活性，吸光度( A 一一A m ) 值為l5 3 0 。說明b c ] 一2 核酶對細胞端粒酶活性表達有一定

5、的抑制作用．從而證實B c l 一2 對細胞端粒酶活性有一定的調節(jié)作用。在b c l ．2 核酶抑制b c l ．2 表達、降低細胞端粒酶活性的同時，可誘導細胞發(fā)生凋亡。經流式細胞儀測定，在細胞周期G 1 期前有凋亡峰出現．凋亡細胞占細胞總數的3 ．1 ％，形態(tài)學觀察也得出相同的結論。但相對于人反義端粒酶R N A 誘導細胞凋亡的作用要低。j 此外，我們還發(fā)現，b c l ．2 核酶在抑制細胞端粒酶活性表達、誘導細胞凋亡的同時，也可引起