不同介入時(shí)間高壓氧治療對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠出血灶周?chē)[及AQP4表達(dá)的影響.pdf

1、目的:高壓氧治療(Hyperbaric oxygen therapy，HBOT)定義為在超過(guò)1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓(Atmospheric pressure)的高氣壓艙內(nèi)，患者通過(guò)呼吸與艙內(nèi)壓力一致的純氧或混合氧，增加機(jī)體內(nèi)氧含量以達(dá)到治療疾病的物理治療方法。腦出血(Intracerebral hemorrhage，ICH)是指原發(fā)的非外界暴力引起的腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的出血，在急性腦血管疾病的發(fā)病中約占20％-30％，發(fā)病后急性期內(nèi)的患者有較高的病死率約

2、為30％-40％。手術(shù)減壓治療已成為公認(rèn)的挽救腦出血急性期患者生命的重要治療方法，但目前尚未證明任何藥物或手術(shù)治療對(duì)腦出血的患者有明確有效的治療效果。腦出血后發(fā)生的一連串由原發(fā)性損害及繼發(fā)性損害引起腦水腫，是腦出血后最主要的繼發(fā)性病理生理過(guò)程，常引起神經(jīng)損傷的再次惡化，導(dǎo)致死亡率增加，因此減輕腦水腫已成為臨床上治療腦出血的主要目標(biāo)。臨床及基礎(chǔ)研究顯示腦出血后介入高壓氧治療可減輕腦水腫，促進(jìn)患者受損的神經(jīng)功能得到改善，但目前并無(wú)大量臨床及

3、基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)的支持。
　　由四聚體結(jié)構(gòu)組成的水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)是具有維持細(xì)胞內(nèi)外水平衡的一種轉(zhuǎn)運(yùn)膜蛋白，其主要通過(guò)改變細(xì)胞膜對(duì)水分子通透能力發(fā)揮作用。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system，CNS)中水通道蛋白4主要分布在星形膠質(zhì)細(xì)胞和室管膜細(xì)胞的細(xì)胞膜上，其次它也大量表達(dá)在下丘腦的室旁核、視上核及口渴中樞所在的區(qū)域。研究發(fā)現(xiàn)，AQP4表達(dá)水平的升高，可以使血腦屏障對(duì)水分子的通透性增

4、加，參與了因血腦屏障破壞而導(dǎo)致腦組織水腫產(chǎn)生的過(guò)程。有基礎(chǔ)研究顯示，高壓氧治療可以降低腦出血后的腦水腫的程度，可能與其降低出血灶周?chē)鶤QP4含量有關(guān)。
　　本課題組的前期研究顯示腦出血大鼠在2.0絕對(duì)大氣壓(Atmosphereabsolute，ATA)的壓力下行高壓氧治療的療效最好。本實(shí)驗(yàn)的腦出血大鼠的模型采用膠原酶誘導(dǎo)法建立，高壓氧治療壓力采用2.0ATA，研究不同時(shí)間點(diǎn)介入高壓氧治療對(duì)腦水含量及AQP4變化的影響，探討腦出血

5、后何時(shí)介入高壓氧治療效果最佳。
　　方法:
　　1..動(dòng)物分組:將185只Wista大鼠隨機(jī)分為正常組(Normal)5只、假手術(shù)組(Sham)60只、腦出血對(duì)照組（Control）60只和高壓氧治療組(HBO)60只。高壓氧治療組，按不同的高壓氧治療介入時(shí)間分為6h介入組(HBO+6h)、1d介入組(HBO+1d)、2d介入組(HBO+2d)和3d介入組(HBO+3d)4個(gè)亞組，每組15只，再按不同的治療次數(shù)分為高壓氧治療

6、后1d、3d、5d組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各5只，制模成功后按不同的介入時(shí)間放入高壓氧艙內(nèi)進(jìn)行治療，高壓氧組進(jìn)行吸氧治療，1次/d，各HBO治療組大鼠分別于高壓氧治療結(jié)束24小時(shí)后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死。假手術(shù)組、腦出血對(duì)照組分組與HBO治療組相同。正常組、假手術(shù)組和腦出血對(duì)照組不進(jìn)行任何治療，與HBO治療組大鼠在相同時(shí)間點(diǎn)處死。
　　2大鼠腦出血模型的制備:選用大鼠尾殼核內(nèi)定位注射Ⅶ型膠原酶法造模型。
　　3.神經(jīng)功能的評(píng)定:在大鼠腦出血模

7、型制備6h后，采用LongaFZ評(píng)分法，對(duì)腦出血后的大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分:0分，無(wú)任何明顯體征;1分，不能完全伸展進(jìn)針對(duì)側(cè)肢體（左側(cè)）;2分，進(jìn)針對(duì)側(cè)肢體癱瘓，向進(jìn)針對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈，有追尾現(xiàn)象;3分，不能站立向進(jìn)針對(duì)側(cè)傾倒;4分，有意識(shí)障礙。2分以上認(rèn)為造模成功。
　　4.高壓氧治療:高壓氧治療組大鼠于術(shù)后6h評(píng)分確定造模成功后于相應(yīng)的介入時(shí)間進(jìn)艙治療。將動(dòng)物放置于特制的木箱中，木箱置于高壓氧艙內(nèi)，壓力設(shè)定在2.0ATA，30分鐘加壓時(shí)間

8、，達(dá)到穩(wěn)壓前的5分鐘采用直排式給氧，氧流量設(shè)定為10L/min（穩(wěn)壓時(shí)氧濃度可達(dá)90％），穩(wěn)壓吸氧60分鐘，停止吸氧，開(kāi)始減壓，速率約為0.01Mpa/min，1次/d。
　　5.腦出血后出血灶周?chē)X組織的水含量應(yīng)用干濕比重法檢測(cè)，血腫周?chē)X組織中AQP4的表達(dá)量則利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1.出血灶周?chē)X水含量測(cè)定的結(jié)果:各時(shí)間點(diǎn)的假手術(shù)組大鼠腦組織的水含量雖較正常組大鼠(73.49±0.89％)有升

9、高的趨勢(shì)，但差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。而對(duì)照組和高壓氧治療組各時(shí)間點(diǎn)大鼠出血灶周?chē)X組織水含量均高于正常組及假手術(shù)組大鼠腦水含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。對(duì)照組可觀察到腦出血后大鼠血腫周?chē)哪X組織水含量在腦出血后第1天開(kāi)始升高，3天達(dá)到高峰，之后逐漸下降。高壓氧治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量均較對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。高壓氧治療組之間的比較:HBO+6h在高壓氧治療1d后，腦組織水含量明顯降低

10、，且這種差異一直延續(xù)到高壓氧治療3d、5d后，與HBO+1d、HBO+2d或HBO+3d比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HBO+1d在高壓氧治療1d后，腦組織水含量降低，并持續(xù)到高壓氧治療3d和5d后，與HBO+2d或HBO+3d比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);但HBO+2d與HBO+3d比較腦組織水含量減輕不明顯(P＞0.05)。
　　2.出血灶周?chē)鶤QP4表達(dá)的結(jié)果:假手術(shù)組大鼠腦組織中反映AQP4表達(dá)水平的O

11、D值于各時(shí)間點(diǎn)雖較正常組大鼠(0.076±0.011)有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。而對(duì)照組和高壓氧治療組各時(shí)間點(diǎn)大鼠出血灶周?chē)从矨QP4表達(dá)水平的OD值均高于正常組及假手術(shù)組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。由對(duì)照組可觀察到腦出血后大鼠出血灶周?chē)X組織中AQP4的含量在腦出血后1天開(kāi)始升高，3天達(dá)到高峰，之后逐漸下降。高壓氧治療組各組大鼠出血灶周?chē)X組織中AQP4的含量均較對(duì)照組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

12、0.05)。高壓氧治療組之間比較:HBO+6h在高壓氧治療1天后，AQP4表達(dá)明顯減少，且這種差異一直持續(xù)到高壓氧治療3d、5d后，與HBO+1d、HBO+2d或HBO+3d比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HBO+1d在高壓氧治療1天后，AQP4表達(dá)減少，并持續(xù)到高壓氧治療3d、5d后，與HBO+2d或HBO+3比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);但HBO+2d與HBO+3d比較AQP4表達(dá)的減少不明顯，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P