不同流場對細胞粘附的影響及粘附后VE-cadherin分布及表達的變化.pdf

1、血流動力學在動脈粥樣硬化發(fā)病機制中占有極為重要的地位,目前的研究結(jié)果表明剪切力的變化通過影響血管內(nèi)皮細胞的結(jié)構(gòu)與功能狀態(tài)而導致各種慢性血管性疾病如動脈粥樣硬化[1-3],特別是內(nèi)皮細胞粘附特性的改變,因為單核細胞與內(nèi)皮細胞粘附是動脈粥樣硬化早期核心事件。本課題組前期實驗在新西蘭兔頸總動脈套環(huán)復制出狹窄后動脈粥樣硬化模型,證明動脈狹窄后局部血流動力學發(fā)生改變特別是局部的紊流的出現(xiàn)與動脈粥樣硬化的形成密切相關(guān)。為了進一步探討兩者的關(guān)系,本實

2、驗首先建立了體外流體模型,成功的模擬出了生理層流及致病紊流,并觀察了不同流場對單核細胞與內(nèi)皮細胞粘附的影響及細胞粘附后內(nèi)皮細胞中VE-cadherin表達與分布變化。
　　第一部分體外模擬三種流場
　　目的：運用流動腔(FLOWCHAMBER)在體外模擬三種流場。
　　方法：對傳統(tǒng)流動腔中的硅膠膜進行改造,并通過調(diào)節(jié)流量大小從而形成不同流場。用FLUENT軟件對流場進行計算分析。
　　結(jié)果：在體外建立了低剪切力紊

3、流、低剪切力層流、高剪切力層流。
　　結(jié)論：經(jīng)FLUENT軟件計算分析,結(jié)果表明三種流場的各項指標符合預期要求能代表體內(nèi)流場的特點。
　　第二部分不同流場對細胞粘附的影響及粘附后內(nèi)皮細胞中VE-cadherin表達及分布的變化
　　目的：探討不同流場對THP-1單核細胞與ECV304內(nèi)皮細胞粘附的影響及細胞粘附后內(nèi)皮細胞VE-cadherin表達及分布的變化。
　　方法：不同的流場作用單層內(nèi)皮細胞及單核細胞6小時

4、,觀察不同流場下單核細胞與內(nèi)皮細胞粘附;用Western蛋白印跡法檢測VE-cadherin的表達,用免疫細胞化學方法在激光共聚焦顯微鏡下觀察 VE-cadherin蛋白在內(nèi)皮細胞中的分布變化。
　　結(jié)果：不同的流場作用單層ECV304內(nèi)皮細胞及THP-1單核細胞6小時發(fā)現(xiàn)低剪切力紊流下單核細胞粘附數(shù)高于低剪切力層流及高剪切力層流且在低剪切力紊流組中有大量單核細胞成簇粘附于內(nèi)皮細胞上;單核細胞與內(nèi)皮細胞共育0小時,1小時,2小時,