VE-cadherin對非小細胞肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移作用的初步研究.pdf

1、研究背景:肺癌侵襲轉(zhuǎn)移機制復(fù)雜，尚未完全明確，尋找新的作用于肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移的基因?qū)τ诜伟┑闹委熀皖A(yù)防均有著重要的意義。血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(vascular endothelial cadherin，VE-cadherin)是特異性表達于血管內(nèi)皮的鈣粘蛋白，促進乳腺癌、直腸癌等多種腫瘤的血管形成。我們研究小組前期發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌(non-small cell lungcancer，NSCLC)中，VE-cadherin與腫瘤血管生成密切相

2、關(guān)，我們推測VE-cadherin在NSCLC的侵襲、轉(zhuǎn)移中起著重要作用，且目前國內(nèi)外在VE-cadherin與NSCLC侵襲、轉(zhuǎn)移作用方面的報道研究甚少。
　　研究目的:探討VE-cadherin在不同侵襲性能非小細胞肺癌(NSCLC)細胞株的表達及沉默VE-cadherin對NSCLC細胞株侵襲、遷移的影響。
　　研究方法:
　　1.通過定量PCR及western blot檢測VE-cadherin在高侵襲性能的N

3、SCLC細胞株P(guān)G、中度侵襲性能的NSCLC細胞株H1299及低侵襲性能的的NSCLC細胞株P(guān)A中mRNA及蛋白的表達;
　　2.通過降低VE-cadherin的表達后探討其對NSCLC細胞株P(guān)G侵襲和遷移的影響:實驗分干擾組、陰性對照組和空白對照組，設(shè)計VE-cadherin-siRNA，瞬時轉(zhuǎn)染PG細胞，實時定量PCR法和Westernblotting法檢測VE-cadherin在各組表達量的變化，計算干擾效率;通過Trans

4、well小室基質(zhì)侵襲實驗檢測對PG侵襲的影響，細胞劃痕實驗來檢測對PG遷移的影響。
　　結(jié)果:
　　1.VE-cadherin在三種NSCLC細胞株中都有表達，其mRNA在不同侵襲性能NSCLC細胞株P(guān)G、H1299、PA的表達水平均值依次為(0.9828±0.0034)、(0.5545±0.0046)、(0.3297±0.0065)，在高侵襲性能的NSCLC細胞株P(guān)G表達最強，其次為中度侵襲性能的NSCLC細胞株H1299

5、; H1299與PG相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4400.07，p＜0.001)，在檢驗水準為0.05水平上，PG、H1299與PA三組兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.000)。
　　2.VE-cadherin在三種NSCLC細胞株中都有表達，其蛋白在不同侵襲性能NSCLC細胞株P(guān)G、H1299、PA的蛋白表達水平均值依次為(0.8713±0.0092)、(0.5270±0.0022)、(0.3379±0.0505)，在高

6、侵襲性能的NSCLC細胞株P(guān)G表達最強，其次為中度侵襲性能的NSCLC細胞株H1299;三種細胞株的蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=1896.482，p＜0.001)，在檢驗水準為0.05水平上，PG、H1299與PA三組兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.000)。
　　3.Real-time PCR顯示，空白對照組、陰性對照組、干擾組的mRNA表達水平均值依次為(0.7149±0.0739)、(0.7131±0.0431)

7、、(0.2099±0.0056)，三組的mRNA表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=103.593，p＜0.001);western blot顯示，空白對照組、陰性對照組、干擾組的蛋白表達水平均值依次為(0.7265±0.0029)、(0.7115±0.0070)、(0.2980±0.0020)，三組的蛋白表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2856.217，p＜0.001)。在檢驗水準為0.05水平上，三組兩兩比較，空白對照組和陰性對照組的mRN

8、A及蛋白水平?jīng)]有明顯差異（mRNA水平，P=0.967;蛋白水平，P=0.0.058）;相對于陰性對照組，干擾組VE-cadherin的mRNA及蛋白表達明顯下調(diào)，相對于陰性對照組，干擾組VE-cadherin表達下調(diào)約70.6％，二者的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.000)。
　　4.Transwell小室基質(zhì)侵襲實驗結(jié)果顯示，干擾組與對照組的侵襲細胞數(shù)分別為34.33±3.06和86.00±7.93，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t

9、=-10.522，P＜0.001)。
　　5.劃痕損傷實驗結(jié)果顯示，干擾組24h、48h、72h的遷移距離分別為890.00±55.67μm，1236.67±61.10μm，1553.00±50.33μm，對照組24h、48h、72h的遷移距離分別為900.00±66.14μm，1610.00±36.06μm，2150.00±50.00μm;對照組與干擾組的細胞遷移距離相比，24h內(nèi)沒有明顯差異(F=0.05，P=0.8246)，

10、48h和72h對照組明顯高于干擾組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(48h， F=0.71.51，P＜0.0001);72h，F(xiàn)=182.66，P＜0.0001)。
　　結(jié)論:
　　1.VE-cadherin在NSCLC細胞株的表達水平與細胞的轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān);侵襲性能越高，VE-cadheim的表達量越高。
　　2.RNA干擾可有效沉默VE-cadheim在NSCLC細胞株的表達。
　　3.利用RNA干擾技術(shù)沉默VE-ca