2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分股動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的側(cè)支血管生長及血管VE-cadherin表達(dá)和通透性變化
  目的:研究細(xì)胞粘附連接中的重要分子—血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)表達(dá)和血管通透性在大鼠股動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的側(cè)支血管生長過程中的改變情況,探討VE-cadherin表達(dá)、通透性變化對側(cè)支血管生長的影響,豐富側(cè)支血管生長機(jī)制中的炎癥形成理論。
  方法:成年Sprague-D

2、awley(SD)大鼠45只,分為正常對照組、假手術(shù)組和股動脈結(jié)扎組。股動脈結(jié)扎組大鼠行股動脈結(jié)扎以誘導(dǎo)側(cè)支血管生長。存活1周和4周,采用明膠-四氧化三鉛血管造影、蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin staining,H.E.)染色和共聚焦免疫熒光組織化學(xué)等方法,觀察大鼠股動脈結(jié)扎后的側(cè)支血管生長的情況和VE-cadherin表達(dá)變化,并用伊文思藍(lán)(Evance blue,EB)通透性實驗檢測血管通透性變化。
  結(jié)

3、果:股動脈結(jié)扎組動物存活1周后,可見側(cè)支血管呈網(wǎng)狀分布,與假手術(shù)組比較,側(cè)支血管數(shù)目和管腔面積均增加;Ki67(細(xì)胞增殖標(biāo)志物)表達(dá)增加,血管處于增殖生長狀態(tài),VE-cadherin表達(dá)下降,并且陽性染色分布不均勻,EB滲出量增加。股動脈結(jié)扎組存活4周后,與存活1周比較,側(cè)支血管管腔面積、血管數(shù)目進(jìn)一步增加,VE-cadherin表達(dá)上調(diào)并恢復(fù)至正常水平,EB滲出量和Ki67表達(dá)減少。假手術(shù)組的VE-cadherin表達(dá)、EB滲出量和血

4、管增殖與正常對照組無明顯差異。
  結(jié)論:①大鼠股動脈結(jié)扎后側(cè)支血管數(shù)量增加、管腔面積增加;②VE-cadherin的表達(dá)和血管通透性在側(cè)支血管生長過程中發(fā)生變化,在生長活躍的側(cè)支血管(股動脈結(jié)扎后1周),VE-cadherin表達(dá)下調(diào),粘附連接結(jié)構(gòu)破壞,通透性增加;在發(fā)育成熟的側(cè)支血管(4周),VE-cadherin表達(dá)增加至正常水平,通透性降低。
  第二部分 NO/NOS對側(cè)支血管生長過程中VE-cadherin表達(dá)和

5、通透性的影響
  目的:使用藥物改變體內(nèi)一氧化氮(nitric oxide,NO)水平,觀察其對側(cè)支血管生長及血管VE-cadherin、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)的表達(dá)變化,以及對側(cè)支血管通透性和炎癥細(xì)胞浸潤的影響,探討外源性藥物對側(cè)支血管內(nèi)皮通透性、側(cè)支血管炎癥形成和生長的影響。
  方法:

6、成年SD大鼠72只,分為假手術(shù)組、股動脈結(jié)扎組、DETANONOate(NO供體)組、L-NAME(NOS抑制劑)組。DETA NONOate組、L-NAME組動物分別在股動脈結(jié)扎基礎(chǔ)上腹腔注射DETANONOate和L-NAME,各組動物存活1周后,結(jié)合共聚焦免疫熒光組織化學(xué)方法、EB和異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖(fluoresceinisothiocyanate-dextran,F(xiàn)ITC-dextran)通透性實驗等,觀察DETAN

7、ONOate和L-NAME對股動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的側(cè)支血管生長及血管VE-cadherin、eNOS、iNOS表達(dá)和通透性的影響,檢測側(cè)支血管生長的主要指標(biāo)有側(cè)支血管的增殖(Ki67)、炎癥細(xì)胞的浸潤(CD11b)和eNOS、iNOS的表達(dá)變化等。
  結(jié)果:動物存活1周后,與單純股動脈結(jié)扎組比較,給予DETANONOate后,側(cè)支血管Ki67陽性細(xì)胞率增加,VE-cadherin在內(nèi)膜表達(dá)減少,呈不連續(xù)狀,形成間隙,血管EB滲出量和巨

8、噬細(xì)胞(CD11b陽性)增加,在側(cè)支血管可見FITC-dextran滲出增加;而給予L-NAME后,側(cè)支血管Ki67陽性細(xì)胞率和eNOS、iNOS表達(dá)減少,VE-cadherin在內(nèi)膜表達(dá)增加,呈連續(xù)分布,血管EB、FITC-dextran滲出和CD11b表達(dá)減少;單純股動脈結(jié)扎組可見CD11b陽性細(xì)胞、eNOS、iNOS表達(dá)、EB和FITC-dextran滲出較假手術(shù)組增加。
  結(jié)論:①大鼠股動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的側(cè)支血管生長過程中,

9、eNOS和iNOS表達(dá)增加,血管通透性增加,側(cè)支血管有炎癥細(xì)胞浸潤。②外源性增加NO水平,可通過抑制VE-cadherin的表達(dá)和破壞細(xì)胞粘附連接以增強(qiáng)血管通透性,從而加速側(cè)支血管炎癥細(xì)胞的形成,促進(jìn)血管細(xì)胞增殖和側(cè)支血管生長。而NOS抑制劑則通過抑制eNOS、iNOS表達(dá),使內(nèi)源性NO合成減少,可通過增加VE-cadherin的表達(dá)和穩(wěn)定粘附連接結(jié)構(gòu),從而降低血管通透性和阻止側(cè)支血管炎癥形成,使得側(cè)支血管生長受抑制。
  第三部

10、分 NO/NOS對體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞VE-cadherin的表達(dá)、細(xì)胞增殖和通透性的影響
  目的:用藥物改變培養(yǎng)液中NO水平,研究其對內(nèi)皮細(xì)胞增殖、VE-cadherin、eNOS表達(dá)和通透性的影響,以進(jìn)一步闡明NO對血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及在側(cè)支血管生長中的可能作用機(jī)制。
  方法:對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical veinendothelial cells,HUVEC)進(jìn)行NO供體(DETA

11、NONOate)或NOS抑制劑(L-NAME)干預(yù)后,用Griess法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中NO產(chǎn)物的濃度,MTT比色法檢測內(nèi)皮細(xì)胞的活性,免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和蛋白印跡(Western blot)法檢測HUVEC增殖活性、eNOS和VE-cadherin的表達(dá);Transwell通透性實驗檢測內(nèi)皮細(xì)胞通透性的變化。
  結(jié)果:加入1、10、100μmol/L DETA NONOate后,NO產(chǎn)物濃度和細(xì)胞通透性較對照組明顯增加,兩者均隨著

12、DETA NONOate濃度增加呈劑量依賴性增加趨勢;而加入10、100、1000μmol/L L-NAME后NO產(chǎn)物濃度和細(xì)胞通透性較對照組減低(P<0.01),兩者均隨著L-NAME濃度增加呈劑量依賴性減少趨勢。10μmol/L DETA NONOate作用后HUVEC細(xì)胞Ki67的表達(dá)和細(xì)胞活性增加、VE-cadherin表達(dá)減少,部分呈斷續(xù)狀分布,細(xì)胞間有少量間隙;而加入100μmol/LL-NAME作用后,HUVEC細(xì)胞eNO

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