NO-NOS在側(cè)支血管生長中對血管VE-cadherin表達及通透性的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩113頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、第一部分股動脈結(jié)扎誘導的側(cè)支血管生長及血管VE-cadherin表達和通透性變化
  目的:研究細胞粘附連接中的重要分子—血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)表達和血管通透性在大鼠股動脈結(jié)扎誘導的側(cè)支血管生長過程中的改變情況,探討VE-cadherin表達、通透性變化對側(cè)支血管生長的影響,豐富側(cè)支血管生長機制中的炎癥形成理論。
  方法:成年Sprague-D

2、awley(SD)大鼠45只,分為正常對照組、假手術(shù)組和股動脈結(jié)扎組。股動脈結(jié)扎組大鼠行股動脈結(jié)扎以誘導側(cè)支血管生長。存活1周和4周,采用明膠-四氧化三鉛血管造影、蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin staining,H.E.)染色和共聚焦免疫熒光組織化學等方法,觀察大鼠股動脈結(jié)扎后的側(cè)支血管生長的情況和VE-cadherin表達變化,并用伊文思藍(Evance blue,EB)通透性實驗檢測血管通透性變化。
  結(jié)

3、果:股動脈結(jié)扎組動物存活1周后,可見側(cè)支血管呈網(wǎng)狀分布,與假手術(shù)組比較,側(cè)支血管數(shù)目和管腔面積均增加;Ki67(細胞增殖標志物)表達增加,血管處于增殖生長狀態(tài),VE-cadherin表達下降,并且陽性染色分布不均勻,EB滲出量增加。股動脈結(jié)扎組存活4周后,與存活1周比較,側(cè)支血管管腔面積、血管數(shù)目進一步增加,VE-cadherin表達上調(diào)并恢復至正常水平,EB滲出量和Ki67表達減少。假手術(shù)組的VE-cadherin表達、EB滲出量和血

4、管增殖與正常對照組無明顯差異。
  結(jié)論:①大鼠股動脈結(jié)扎后側(cè)支血管數(shù)量增加、管腔面積增加;②VE-cadherin的表達和血管通透性在側(cè)支血管生長過程中發(fā)生變化,在生長活躍的側(cè)支血管(股動脈結(jié)扎后1周),VE-cadherin表達下調(diào),粘附連接結(jié)構(gòu)破壞,通透性增加;在發(fā)育成熟的側(cè)支血管(4周),VE-cadherin表達增加至正常水平,通透性降低。
  第二部分 NO/NOS對側(cè)支血管生長過程中VE-cadherin表達和

5、通透性的影響
  目的:使用藥物改變體內(nèi)一氧化氮(nitric oxide,NO)水平,觀察其對側(cè)支血管生長及血管VE-cadherin、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、誘導型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)的表達變化,以及對側(cè)支血管通透性和炎癥細胞浸潤的影響,探討外源性藥物對側(cè)支血管內(nèi)皮通透性、側(cè)支血管炎癥形成和生長的影響。
  方法:

6、成年SD大鼠72只,分為假手術(shù)組、股動脈結(jié)扎組、DETANONOate(NO供體)組、L-NAME(NOS抑制劑)組。DETA NONOate組、L-NAME組動物分別在股動脈結(jié)扎基礎(chǔ)上腹腔注射DETANONOate和L-NAME,各組動物存活1周后,結(jié)合共聚焦免疫熒光組織化學方法、EB和異硫氰酸熒光素標記的葡聚糖(fluoresceinisothiocyanate-dextran,F(xiàn)ITC-dextran)通透性實驗等,觀察DETAN

7、ONOate和L-NAME對股動脈結(jié)扎誘導的側(cè)支血管生長及血管VE-cadherin、eNOS、iNOS表達和通透性的影響,檢測側(cè)支血管生長的主要指標有側(cè)支血管的增殖(Ki67)、炎癥細胞的浸潤(CD11b)和eNOS、iNOS的表達變化等。
  結(jié)果:動物存活1周后,與單純股動脈結(jié)扎組比較,給予DETANONOate后,側(cè)支血管Ki67陽性細胞率增加,VE-cadherin在內(nèi)膜表達減少,呈不連續(xù)狀,形成間隙,血管EB滲出量和巨

8、噬細胞(CD11b陽性)增加,在側(cè)支血管可見FITC-dextran滲出增加;而給予L-NAME后,側(cè)支血管Ki67陽性細胞率和eNOS、iNOS表達減少,VE-cadherin在內(nèi)膜表達增加,呈連續(xù)分布,血管EB、FITC-dextran滲出和CD11b表達減少;單純股動脈結(jié)扎組可見CD11b陽性細胞、eNOS、iNOS表達、EB和FITC-dextran滲出較假手術(shù)組增加。
  結(jié)論:①大鼠股動脈結(jié)扎誘導的側(cè)支血管生長過程中,

9、eNOS和iNOS表達增加,血管通透性增加,側(cè)支血管有炎癥細胞浸潤。②外源性增加NO水平,可通過抑制VE-cadherin的表達和破壞細胞粘附連接以增強血管通透性,從而加速側(cè)支血管炎癥細胞的形成,促進血管細胞增殖和側(cè)支血管生長。而NOS抑制劑則通過抑制eNOS、iNOS表達,使內(nèi)源性NO合成減少,可通過增加VE-cadherin的表達和穩(wěn)定粘附連接結(jié)構(gòu),從而降低血管通透性和阻止側(cè)支血管炎癥形成,使得側(cè)支血管生長受抑制。
  第三部

10、分 NO/NOS對體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細胞VE-cadherin的表達、細胞增殖和通透性的影響
  目的:用藥物改變培養(yǎng)液中NO水平,研究其對內(nèi)皮細胞增殖、VE-cadherin、eNOS表達和通透性的影響,以進一步闡明NO對血管內(nèi)皮細胞的作用及在側(cè)支血管生長中的可能作用機制。
  方法:對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical veinendothelial cells,HUVEC)進行NO供體(DETA

11、NONOate)或NOS抑制劑(L-NAME)干預后,用Griess法檢測細胞培養(yǎng)液中NO產(chǎn)物的濃度,MTT比色法檢測內(nèi)皮細胞的活性,免疫熒光細胞化學和蛋白印跡(Western blot)法檢測HUVEC增殖活性、eNOS和VE-cadherin的表達;Transwell通透性實驗檢測內(nèi)皮細胞通透性的變化。
  結(jié)果:加入1、10、100μmol/L DETA NONOate后,NO產(chǎn)物濃度和細胞通透性較對照組明顯增加,兩者均隨著

12、DETA NONOate濃度增加呈劑量依賴性增加趨勢;而加入10、100、1000μmol/L L-NAME后NO產(chǎn)物濃度和細胞通透性較對照組減低(P<0.01),兩者均隨著L-NAME濃度增加呈劑量依賴性減少趨勢。10μmol/L DETA NONOate作用后HUVEC細胞Ki67的表達和細胞活性增加、VE-cadherin表達減少,部分呈斷續(xù)狀分布,細胞間有少量間隙;而加入100μmol/LL-NAME作用后,HUVEC細胞eNO

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論