Myocilin蛋白對(duì)人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞FN表達(dá)及細(xì)胞遷移與粘附的影響.pdf

1、目的:在體外培養(yǎng)人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞的基礎(chǔ)上，研究myocilin蛋白對(duì)人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)表達(dá)以及對(duì)小梁網(wǎng)細(xì)胞遷移、粘附功能的影響，探索myocilin蛋白與原發(fā)性開角型青光眼發(fā)病的關(guān)系。
　　方法:采用組織塊培養(yǎng)法體外培養(yǎng)正常人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞，并運(yùn)用倒置顯微鏡觀察、透射電鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。取傳三代的小梁網(wǎng)細(xì)胞分別加入含重組myocilin蛋白終濃度為0 ug/ml（對(duì)照組）、0

2、.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml的無血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，運(yùn)用Western blot、Elisa法分別檢測(cè)小梁網(wǎng)細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞培養(yǎng)液中FN的表達(dá)水平；運(yùn)用Transwell小室法、CCK-8法檢測(cè)myocilin蛋白對(duì)小梁網(wǎng)細(xì)胞遷移、粘附的影響。
　　結(jié)果:1.成功建立人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，經(jīng)鑒定確定為人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞。2.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，在一定范圍

3、內(nèi)，隨myocilin蛋白濃度的增高小梁網(wǎng)細(xì)胞內(nèi)FN表達(dá)呈下降趨勢(shì)。3.Elisa法檢測(cè)經(jīng)濃度為0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml myocilin蛋白干預(yù)的各組細(xì)胞培養(yǎng)液中FN濃度為：0.5817±0.0959ug/ml、0.5572±0.0443ug/ml、0.5868±0.0735ug/ml、0.5015±0.0472ug/ml、0.4263±0.0426ug/ml、0.

4、2838±0.0972ug/ml。1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/ml myocilin蛋白組與對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且此三組實(shí)驗(yàn)組組間比較存在顯著性差異。4.Tra ns we ll小室法檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移數(shù)較對(duì)照組少，且實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.運(yùn)用CCK-8法檢測(cè)經(jīng)濃度為0ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、1.5ug/ml、2ug/ml、2.5ug/m

5、l myocilin蛋白處理的各組細(xì)胞吸光度值的均值分別為0.1614±0.0061、0.1529±0.0139、0.1273±0.0172、0.1271±0.0230、0.1165±0.0084、0.1103±0.0045。隨myocilin蛋白濃度的增高各組細(xì)胞吸光度值呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論:1.myocilin蛋白能抑制小梁網(wǎng)細(xì)胞纖維連接蛋白的表達(dá)，并呈現(xiàn)一定的劑量依耐