Duchenne-Becker肌營養(yǎng)不良致病基因DMD的分子診斷技術體系研究.pdf

1、Duchenne/Becker 肌營養(yǎng)不良（Duchenne/Becker muscular dystrophy, DMD/BMD）是最常見的X連鎖隱性遺傳病之一，在男性人群中的發(fā)病率約為1/3500，女性人群中的攜帶率約為1/2300。其致病基因DMD部分區(qū)域的缺失、重復或點突變會影響其編碼的Dystrophin蛋白表達，導致骨骼肌萎縮和無力。細致檢測其基因序列，明確突變位點，對提供準確的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷十分重要，在治療方法的選擇和

2、預后判斷上也有很大幫助。多重連接依賴的探針擴增技術（multiplex ligation dependent probe amplification, MLPA）作為一種新興的診斷方法，可對DMD基因全部外顯子的拷貝數(shù)異常進行檢測。國內(nèi)外已有多篇采用MLPA配合其他方法對DMD/BMD進行診斷的報道，但是很少有報道涉及MLPA在DMD基因檢測應用中的優(yōu)勢和局限，以及可能造成假陽性的單外顯子異常結果的處理方法。
　　 本研究應用M

3、LPA對72例確診的DMD/BMD患者進行了外顯子缺失/擴增檢測，確認 50例缺失/擴增（69.44％），疑似3例（4.17％）；對單外顯子異常結果通過PCR、測序和熒光定量PCR進行進一步結果驗證，發(fā)現(xiàn)3例與MLPA原有結果不符，假陽性率在結果驗證的樣本中占16.7％。由于技術局限，MLPA只能檢測單個或多個外顯子的缺失/重復，忽視占突變總數(shù)近20％左右的單個外顯子內(nèi)的微小缺失、擴增等突變形式。而在現(xiàn)有的其他檢測方法中，也沒有簡便的方

4、法適合臨床開展。針對這種情況，研究的第二部分基于本科室的專利平臺——多重延伸連接依賴的探針擴增技術（Multiplex extension ligation dependent probe amplification，MELPA），設計了一系列可檢測DMD基因全部外顯子的探針組，用含有微小突變的樣本進行檢驗證明其可行，并對10例MLPA檢測為陰性的確診樣本進行了篩查。MLPA技術成為DMD基因外顯子拷貝數(shù)異常的首選檢測方法的同時，結果提