Duchenne型肌營(yíng)養(yǎng)不良的遺傳學(xué)、血清生化學(xué)及病理學(xué)的探討.pdf

1、目的:觀察杜氏型肌營(yíng)養(yǎng)不良(DMD)基因突變分布情況，了解兒童DMD基因突變特點(diǎn)。探討DMD患兒血清肌酸激酶(CK)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的變化規(guī)律及CK與AST、ALT之間的相關(guān)性。分析DMD肌肉病理改變，及其與年齡的關(guān)系。
　　 方法:收集DMD的男性患兒。采用多重連接依賴性探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)檢測(cè)患兒DMD基因的突變情況。采用酶聯(lián)免疫熒光法和速率法分別測(cè)定不同年齡段患兒的血清CK和

2、ALT、AST活性。冰凍切片，肌肉標(biāo)本經(jīng)常規(guī)組織化學(xué)染色及免疫組織化學(xué)染色，觀察DMD患兒肌肉病理改變及抗肌萎縮蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:共收集DMD患兒177名。(1)進(jìn)行DMD基因檢測(cè)的患兒共163例。MLPA法檢測(cè)DMD外顯子缺失71.17％(116/163)，外顯子重復(fù)10.43％(17/163)，外顯子未見(jiàn)異常18.40％(30/163)。30例外顯子未見(jiàn)異常的患兒中，有10名患兒運(yùn)用第2代高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行了DMD

3、基因測(cè)序，均發(fā)現(xiàn)DMD基因點(diǎn)突變。存在2個(gè)缺失“熱區(qū)”:主缺失熱區(qū)位于第45～53外顯子，占缺失總數(shù)的34.30％;次缺失熱區(qū)位于第5～19外顯子，占缺失總數(shù)的26.23％。缺失片段以第49～52外顯子最多，單個(gè)外顯子缺失主要分布在第45外顯子。重復(fù)突變主要位于DMD基因的N端和棒狀區(qū)。(2)進(jìn)行血清酶學(xué)檢測(cè)的患兒共165例，共采血318次。嬰兒期DMD患兒的CK、AST、ALT活性即明顯升高，分別達(dá)到正常值的10、7、5倍以上，并均維

4、持至8歲，以后隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸回落。血清CK分別與AST（r=0.817，p＜0.01）、ALT(r=0.669，p＜0.01)呈正相關(guān)。(3)進(jìn)行肌肉活檢的患兒共124例。DMD臨床表現(xiàn)進(jìn)行性加重，嬰幼兒期已存在病理變化，主要表現(xiàn)為肌纖維的萎縮及肥大，可見(jiàn)肌纖維變性及壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn);病程后期主要病理改變?yōu)樯贁?shù)肌纖維殘存，脂肪結(jié)締組織增生，年齡越大病變?cè)絿?yán)重。Dys-C、Dys-N、Dys-R免疫組織化學(xué)染色均為0～1級(jí)表達(dá)，與患兒

5、年齡及臨床癥狀嚴(yán)重程度無(wú)特定關(guān)系。
　　 結(jié)論:(1)DMD以基因缺失突變?yōu)橹?，突變位點(diǎn)非均勻分布于整個(gè)基因，存在突變熱區(qū)。(2)DMD患兒血清CK、AST、ALT活性反映DMD的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，血清AST、ALT與CK之間有顯著相關(guān)性，可為早期診斷、減少誤診提供重要依據(jù)。(3)DMD患者臨床病情和病理改變的嚴(yán)重程度主要與病程和活檢年齡相關(guān)，與是否保留少數(shù)dystrophin蛋白陽(yáng)性纖維無(wú)明顯相關(guān)。(4)突變基因位點(diǎn)及長(zhǎng)度與DM