重組腺相關(guān)病毒載體介導的人類dystrophin小基因?qū)uchenne肌營養(yǎng)不良病理與功能的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、華中科技丈學同濟醫(yī)學院博士學傳論支重組腺相關(guān)病毒載體介導的人類dystrophin小基因?qū)uchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx形態(tài)和功能影響中文摘要華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院申請人姓名:黎紅華指導教師:方思羽導師小組成員:汪道文張?zhí)K明Duchenne肌營養(yǎng)不良(DMD)是由于骨胳肌肌膜上的抗肌萎縮蛋白(dystrophin)完全或部分缺失引起的肌肉遺傳病為特征,23歲發(fā)病,發(fā)病率為13500男嬰的研究給DMD患者帶來了希望。肇

2、彝:滬病以肌纖維的變性、壞死刁目前尚無有效治療方法?;蛑委熃闐MD基因治療的研究成為國外學者關(guān)注的熱點,國內(nèi)尚剛開始起步。1a往基因治療研究中,裸質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等載體應(yīng)用較多,但因某些自身缺陷不能滿足治療的需要。裸質(zhì)粒DNA體內(nèi)表達時間短腺病毒載體因免疫反應(yīng)表達時間有限,逆轉(zhuǎn)錄病毒僅感染分裂細喲董添相關(guān)病毒載(recombinantadenoassociatedvirus)是一種近年來被廣泛研究的基因治療載體,轉(zhuǎn)染后可獲得

3、穩(wěn)定、長期、高效的表達,能轉(zhuǎn)染分裂期和非分裂期細胞并且無細胞免疫原性,轉(zhuǎn)染效率較高,而且有它獨特的優(yōu)點—可以整合到生物染色體的特定部位,解決了病毒載體安全性的問題。較以往的腺病毒載體、質(zhì)粒直接注射有更多優(yōu)勢。華中科波大學同琦醫(yī)學院博士學位論丈結(jié)果1.本研究成功構(gòu)建了重組腺相關(guān)病毒載體rAAVSMCKA3999,斑點雜交測定病毒滴度達到為5xlo`0p.f.umi.2.rAAVSMCKA3999轉(zhuǎn)染DMD模型小鼠mdx膝腸肌,基因蛋白水平

4、表達持續(xù)7個月以上。3.以rAAVSMCKA3999對DMD模型小鼠mdx治療,能使其肌膜dystrophin骨架蛋白及DAP(dystrophin相關(guān)蛋白)中的Ssarcoglycans恢復,肌細胞膜完整性恢復,使肌病超微病理改變明顯改善,且療效持續(xù)到治療后4個月以上,提示重組腺相關(guān)病毒載體介導的dystrophin小基因SMCKA3999對DMD治療有效,能顯著改善mdx小鼠病理變化。4.進一步研究rAAVSMCKA3999對肌肉功

5、能療效,rAAVSMCKA3999能使DMD病理性肌電圖改變明顯改善,肌力恢復口5.C57BL6鼠一次性局部肌注轉(zhuǎn)染rAAVLacZ,基因轉(zhuǎn)染2個月及5個月后,均呈LacZ基因陽性表達,基因治療5個月無表達減低。經(jīng)股動脈注射rAAVLacZ后肢骨骼肌的肌膜及血管壁平滑肌LacZ基因廣泛轉(zhuǎn)染。經(jīng)股動脈轉(zhuǎn)染rAAVSMCKA3999,基因在mdx后肢肌群表達5月以上。結(jié)論:rAAVSMCKA3999對DMD治療有效,能顯著改善mdx小鼠病理

6、變化。進一步研究顯示能顯著改善mdx小鼠肌肉功能,應(yīng)用重組腺相關(guān)病毒載體介導的dystrophin小基因SMCKA3999基因治療是臨床治療DMD有希望的方法。重組腺相關(guān)病毒載體介導的報告基因LacZ可在C57BL6鼠骨胳肌中高效持續(xù)表達5月以上。經(jīng)股動脈轉(zhuǎn)染rAAVSMCKA3999在后肢肌群表達5月以上,經(jīng)股動脈轉(zhuǎn)染是有希望的下”肌肉轉(zhuǎn)染途徑。,丫一關(guān)鍵詞:重組腺,目關(guān)病毒載體:肌營養(yǎng)不良抗肌萎縮蛋白懊dystrophin)一—一7

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