重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的人類dystrophin小基因?qū)uchenne肌營(yíng)養(yǎng)不良病理與功能的影響.pdf

1、華中科技丈學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)傳論支重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的人類dystrophin小基因?qū)uchenne肌營(yíng)養(yǎng)不良模型鼠mdx形態(tài)和功能影響中文摘要華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院申請(qǐng)人姓名:黎紅華指導(dǎo)教師:方思羽導(dǎo)師小組成員:汪道文張?zhí)K明Duchenne肌營(yíng)養(yǎng)不良(DMD)是由于骨胳肌肌膜上的抗肌萎縮蛋白(dystrophin)完全或部分缺失引起的肌肉遺傳病為特征，23歲發(fā)病，發(fā)病率為13500男嬰的研究給DMD患者帶來(lái)了希望。肇

2、彝:滬病以肌纖維的變性、壞死刁目前尚無(wú)有效治療方法。基因治療近年DMD基因治療的研究成為國(guó)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)，國(guó)內(nèi)尚剛開始起步。1a往基因治療研究中，裸質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等載體應(yīng)用較多，但因某些自身缺陷不能滿足治療的需要。裸質(zhì)粒DNA體內(nèi)表達(dá)時(shí)間短腺病毒載體因免疫反應(yīng)表達(dá)時(shí)間有限，逆轉(zhuǎn)錄病毒僅感染分裂細(xì)喲董添相關(guān)病毒載(recombinantadenoassociatedvirus)是一種近年來(lái)被廣泛研究的基因治療載體，轉(zhuǎn)染后可獲得

3、穩(wěn)定、長(zhǎng)期、高效的表達(dá)，能轉(zhuǎn)染分裂期和非分裂期細(xì)胞并且無(wú)細(xì)胞免疫原性，轉(zhuǎn)染效率較高，而且有它獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)—可以整合到生物染色體的特定部位，解決了病毒載體安全性的問(wèn)題。較以往的腺病毒載體、質(zhì)粒直接注射有更多優(yōu)勢(shì)。華中科波大學(xué)同琦醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論丈結(jié)果1.本研究成功構(gòu)建了重組腺相關(guān)病毒載體rAAVSMCKA3999，斑點(diǎn)雜交測(cè)定病毒滴度達(dá)到為5xlo`0p.f.umi.2.rAAVSMCKA3999轉(zhuǎn)染DMD模型小鼠mdx膝腸肌，基因蛋白水平

4、表達(dá)持續(xù)7個(gè)月以上。3.以rAAVSMCKA3999對(duì)DMD模型小鼠mdx治療，能使其肌膜dystrophin骨架蛋白及DAP(dystrophin相關(guān)蛋白)中的Ssarcoglycans恢復(fù)，肌細(xì)胞膜完整性恢復(fù)，使肌病超微病理改變明顯改善，且療效持續(xù)到治療后4個(gè)月以上，提示重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的dystrophin小基因SMCKA3999對(duì)DMD治療有效，能顯著改善mdx小鼠病理變化。4.進(jìn)一步研究rAAVSMCKA3999對(duì)肌肉功

5、能療效，rAAVSMCKA3999能使DMD病理性肌電圖改變明顯改善，肌力恢復(fù)口5.C57BL6鼠一次性局部肌注轉(zhuǎn)染rAAVLacZ，基因轉(zhuǎn)染2個(gè)月及5個(gè)月后，均呈LacZ基因陽(yáng)性表達(dá)，基因治療5個(gè)月無(wú)表達(dá)減低。經(jīng)股動(dòng)脈注射rAAVLacZ后肢骨骼肌的肌膜及血管壁平滑肌LacZ基因廣泛轉(zhuǎn)染。經(jīng)股動(dòng)脈轉(zhuǎn)染rAAVSMCKA3999，基因在mdx后肢肌群表達(dá)5月以上。結(jié)論:rAAVSMCKA3999對(duì)DMD治療有效，能顯著改善mdx小鼠病理

6、變化。進(jìn)一步研究顯示能顯著改善mdx小鼠肌肉功能，應(yīng)用重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的dystrophin小基因SMCKA3999基因治療是臨床治療DMD有希望的方法。重組腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的報(bào)告基因LacZ可在C57BL6鼠骨胳肌中高效持續(xù)表達(dá)5月以上。經(jīng)股動(dòng)脈轉(zhuǎn)染rAAVSMCKA3999在后肢肌群表達(dá)5月以上，經(jīng)股動(dòng)脈轉(zhuǎn)染是有希望的下”肌肉轉(zhuǎn)染途徑。，丫一關(guān)鍵詞:重組腺，目關(guān)病毒載體:肌營(yíng)養(yǎng)不良抗肌萎縮蛋白懊dystrophin)一—一7