干細(xì)胞移植治療Duchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx的實驗研究.pdf

1、Duchenne氏型肌營養(yǎng)不良(Duchennemusculardystrophy,DMD)是最常見的致死的X連鎖隱性遺傳性肌病，發(fā)病率為男性活嬰的1/3500。一般兒童期起病，進行性骨骼肌萎縮無力和小腿腓腸肌假性肥大，幾乎20歲之前死于呼吸肌麻痹或心力衰竭。已發(fā)現(xiàn)DMD的致病基因為dystrophin基因的缺失，引起肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)蛋白dystrophin蛋白的缺乏。但其具體分子通路仍不明確。目前的治療方法主要集中在細(xì)胞移植和基因治療方面

2、。成肌細(xì)胞移植治療DMD的臨床實驗的失敗使DMD的細(xì)胞移植治療一度停滯。本研究分別觀察兩種較有希望的干細(xì)胞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞移植治療肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx小鼠的可能性。 第一部分:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療Duchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx的實驗觀察 目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)移植治療mdx鼠后肌肉病理改變及dystrophin蛋白表達變化。方法：分離培養(yǎng)正常C57BL/6小鼠MSCs，局部肌肉

3、注射移植入2周齡Duchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx鼠腓腸肌為治療組，以同只MSCs注射對側(cè)為對照組，腓腸肌注射等劑量磷酸鹽緩沖液。以同齡健康C57BL/6小鼠為正常組。16周后觀察肌肉病理改變及dystrophin蛋白表達變化。結(jié)果：MSCs移植治療組mdx鼠肌肉病理明顯改善，較對照組肌纖維核內(nèi)移明顯減少，dystrophin蛋白陽性表達肌纖維增加明顯。 第二部分:小鼠胚胎干細(xì)胞移植治療Duchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx

4、的實驗觀察 目的：研究Duchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠局部肌肉內(nèi)鼠胚胎干細(xì)胞移植治療后ESCs的分化和肌肉病理改變及dystrophin蛋白表達變化。方法：EGFP標(biāo)記的胚胎干細(xì)胞局部肌肉注射移植入Duchenne肌營養(yǎng)不良模型鼠mdx鼠，4、8周后觀察ESCs的肌肉內(nèi)分化和肌肉病理改變及dystrophin蛋白表達變化。結(jié)果：胚胎干細(xì)胞移植后分化為骨骼肌細(xì)胞的比例極低，mdx鼠肌肉病理改善不明顯，1dystrophin蛋白陽性