1型鴨甲肝病毒在SPF雞胚上的傳代及其3C基因變異規(guī)律的研究.pdf

1、鴨病毒性肝炎（Duck viral hepatitis，DVH）是由鴨病毒性肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）引起的一種雛鴨的急性、高度致死性的傳染病，臨床上主要表現(xiàn)為食欲減退、神經(jīng)癥狀、突然死亡和肝臟腫大出血。鴨病毒性肝炎病毒 I型屬于小 RNA病毒科，命名為鴨甲肝病毒（Duck hepatitis A virus，DHAV），主要感染3周齡以內(nèi)的雛鴨，雛鴨發(fā)病后，死亡率急劇上升。病死鴨多呈角弓反張現(xiàn)象，剖檢

2、肝臟特征性癥狀為出血性病變，是嚴重危害養(yǎng)鴨業(yè)的疫病之一。雖然我國目前已有DHV疫苗的生產(chǎn)和廣泛使用,但該病仍然在我國各地流行并造成肉鴨養(yǎng)殖業(yè)的重大損失。因此,尋找安全有效的理想疫苗毒株，研發(fā)高效的鴨病毒性肝炎疫苗，用于鴨肝炎病的預(yù)防或控制，依然是亟待解決的問題。
　　因為鴨甲肝病毒的變異機理尚不清楚，而3C蛋白作為功能性蛋白參與裂解功能，是否與毒力變化相關(guān)尚未了解。為了解鴨甲肝病毒1型（DHAV-1）基因的變異規(guī)律，本研究選擇在S

3、PF雞胚上對病毒進行傳代試驗，通過對3C基因的克隆測序及毒力的測定，為深入了解DHAV-1的遺傳變異規(guī)律提供依據(jù)。
　　本研究將完成以下兩部分內(nèi)容：
　　第一部分：5株DHAV-1病毒在SPF雞胚上的傳代致弱
　　5株DHAV-1分別為ALY0901（1A），AZC14117（2A），A-病料毒（3A），A2-14（4A），ADNA-launch（5A）。將這5株毒經(jīng)過處理后作為初代毒，經(jīng)尿囊腔接種9-12日齡SPF雞

4、胚，接種量為0.2mL/胚。留存24小時后的死亡雞胚，在4℃冰箱冷卻4-12h后，無菌收取雞胚尿囊液并觀察胚胎病變，將所收尿囊液對應(yīng)接入下一批雞胚，連續(xù)傳代60代。結(jié)果表明：雞胚傳代5代之前，24-96h之間雞胚并無死亡現(xiàn)象，胚體也無明顯病變；5代之后，到20代為止，雞胚開始出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，并且胚體明顯有大量出血點。死亡時間集中在72h左右。20-50代72h內(nèi)雞胚無死亡現(xiàn)象，50-60代重新出現(xiàn)雞胚死亡。
　　第二部分：DHAV-