重組人生長激素對大鼠腹部游離皮瓣成活影響的實驗研究.pdf

1、目的： 探討局部注射重組人生長激素對大鼠腹部游離皮瓣對皮瓣存活的影響，探討rhGH對皮瓣下血管形成的調(diào)節(jié)作用，為深入了解rhGH在皮瓣成活過程中的作用及其臨床應用提供理論基礎。 方法： 選取Wistar大鼠20只，雌雄不拘，體重350～400 g。將動物隨機分為rhGH組和生理鹽水組，每組10只。于大鼠腹部正中設計雙側(cè)腹壁下動靜脈為蒂的聯(lián)合軸型皮瓣，皮瓣兩側(cè)位于腋前線，上界位于胸前，皮瓣下界位于恥骨上方。于皮瓣右

2、側(cè)部分（結(jié)扎血管側(cè)）設計兩排共10個注射點，rhGH組注射劑量為rhGH0．1 IU/kg，用生理鹽水稀釋至總量為1 ml，用微量注射器（臨床皮試用1 ml微量注射器）分別給予每個注射點在皮深筋膜下注入0．1ml，間隔1cm。同理，生理鹽水組注射生理鹽水，方法及劑量相同于rhGH組；按設計用刀沿畫線切開皮瓣遠端達深筋膜淺層，先分別游離出雙側(cè)腹壁下動靜脈，再在深筋膜與肌膜間作切開分離，然后掀起皮瓣，結(jié)扎并切斷右側(cè)腹壁下動靜脈，將左側(cè)腹壁下

3、動靜脈標記后切斷，形成左腹壁下動靜脈的大型游離皮瓣，皮瓣原位用4-0絲線間斷縫合，保證皮膚對合良好，留下皮瓣左下方皮膚暫不縫合留做吻合血管使用，用11-0無損傷縫合線吻合血管，先吻合靜脈，再吻合動脈，吻合好動脈后松開血管夾，見血管有血流通過，皮瓣顏色逐步紅潤，再縫合左下方皮膚，用紅霉菌軟膏涂抹創(chuàng)緣。術(shù)后觀察皮瓣成活及壞死情況，分別于術(shù)后第7天測量兩組皮瓣成活面積，計算皮瓣成活百分率；于第14天在成活區(qū)與壞死區(qū)交界處切取標本，做常規(guī)HE染

4、色觀察組織形態(tài)變化，于光鏡下觀察組織新生血管、肉芽組織增生等情況。再做免疫組化（SP法）分析血管內(nèi)皮細胞VEGF的表達及微血管密度（MVD）的檢測。結(jié)果經(jīng)采用Leica Q500MC顯微圖像分析系統(tǒng)進行電腦圖像分析，用SPSS12．0建立數(shù)據(jù)庫并對結(jié)果進行方差分析。 結(jié)果： 1．大體觀察術(shù)后第7天觀察，rhGH組的皮瓣壞死面積較生理鹽水組小，生理鹽水組皮瓣較實驗組壞死嚴重，壞死部分位于皮瓣遠端偏右側(cè)；術(shù)后14天，皮瓣成活

5、部分與壞死部分界限清楚，成活皮瓣收縮明顯，部分壞死皮瓣硬痂已與基底創(chuàng)面分離脫落，基底為肉芽創(chuàng)面，生理鹽水組皮瓣創(chuàng)面水腫、炎性滲出較rhGH組嚴重。 2．皮瓣存活面積及成活率檢測術(shù)后第7天，rhGH組及生理鹽水組的皮瓣存活面積分別為47．65±3．93 c㎡和29．97±2．89 c㎡，rhGH組皮瓣最大及最小存活面積分別為52．38 c㎡及39．64 c㎡，生理鹽水組皮瓣最大及最小存活面積分別為36．51 c㎡及26．39 c㎡

6、；rhGH組與生理鹽水組皮瓣平均存活率分別為84．00±4．96%及52．40±5．99%。rhGH組皮瓣成活面積百分比明顯高于生理鹽水組，兩組有顯著性差異，p<0．05。 3．病理組織學檢查 rhGH組皮瓣成活區(qū)可見大量新生血管形成，生理鹽水組成活區(qū)新生血管的形成明顯低于rhGH組。 4．VEGF蛋白檢測標本VEGF免疫組化染色可見在rhGH組的皮瓣分布較多棕黃色顆粒的VEGF免疫陽性細胞；而在生理鹽水組VEGF免疫陽