載脂蛋白A-I對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用.pdf

1、本實驗采用改良的冷乙醇沉淀法，從血漿F-Ⅳ組分中提取純化人血漿載脂蛋白A-Ⅰ(Apolipoprotein A-Ⅰ，ApoA-Ⅰ)，經(jīng)聚乙二醇濃縮后，用150 mmol/L磷酸緩沖液透析，得到可用于實驗的純化的ApoA-Ⅰ。用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)和蛋白免疫印跡法(westernblot)鑒定分離得到的蛋白為純化的ApoA-Ⅰ。對LPS

2、激活的巨噬細胞細胞毒性抑制作用的實驗顯示，制備得到的ApoA-Ⅰ具有生物活性。 在水合氯醛麻醉及氣管插管條件下，結扎SD大鼠心臟左冠狀動脈前降支(LAD)，造成心肌組織局部缺血，30分鐘后，血管再通，形成心肌缺血再灌注模型。再灌注前10分鐘股靜脈給予ApoA-Ⅰ(20 mg/kg)或者生理鹽水(NS)處理。假手術組除不結扎動脈外，其它與生理鹽水治療組相同。再灌注3小時后，股靜脈取血，測定血清肌酸激酶(creatin kinase

3、，CK)活性。再灌注6小時后，取一部分大鼠的心臟，測定組織勻漿中腫瘤壞死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量，另取部分大鼠的心臟做病理切片，觀察組織病理變化。再灌注24小時后，取大鼠心臟做免疫組化測定細胞間黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1，ICAM-1)的表達情況和病理切片。 結果表明，ApoA-Ⅰ能夠顯著降低血清中CK水平：NS組CK活力為1121±1623.23 U/

4、L，而ApoA-Ⅰ治療組(20 mg/kg)中CK活力為424.75±154.53 U/L(p<0.01)。低劑量ApoA-Ⅰ(5 mg/kg)治療組CK活力為898±383.96 U/L，但與NS組相比，在統(tǒng)計學上無明顯差異(p=0.067)。同時，ApoA-Ⅰ能夠顯著降低心肌組織TNF-α和IL-6的水平：NS組TNF-α和IL-6的濃度分別為160.45±34.32pg/mg protein和38-86±9.65 pg/mg pr

5、otein，ApoA-Ⅰ治療組(20 mg/kg)中TNF-α,和IL-6的濃度分別為95.65±34.89 pg/mg protein(p<0.01)和21.74±3.79 pg/mgprotein(p<0.01)。大鼠心臟免疫組化分析表明，再灌注24小時后，NS組血管內(nèi)皮細胞ICAM-1的表達量明顯增加，ApoA-Ⅰ治療組(20 mg/kg)可顯著降低血管內(nèi)皮細胞ICAM-1的表達水平。另外，組織病理分析表明，NS組可見心肌細胞壞死