拉米夫定耐藥患者的臨床特點(diǎn)及耐藥毒株的分子病毒學(xué)研究.pdf

1、隨著以拉米夫定為代表的新一代核苷類似物在中國(guó)慢性乙型肝炎患者中的廣泛應(yīng)用,核苷類似物耐藥成為目前臨床關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題.我們采用本室先前建立的RFLP方法篩檢YMDD變異并將其應(yīng)用于臨床監(jiān)測(cè)拉米夫定治療過(guò)程中耐藥性的產(chǎn)生,取得了較好的效果.由于RFLP的局限性,我們對(duì)篩檢YMDD變異陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行了P基因測(cè)序,以進(jìn)一步了解拉米夫定耐藥株的P基因A-E區(qū)序列特點(diǎn).該研究中還有2例患者中分別因?yàn)镻基因rtD83N和rtM204I變異導(dǎo)致HBsA

2、g的表達(dá)提前出現(xiàn)終止,但患者仍表現(xiàn)為HBsAg陽(yáng)性,說(shuō)明在患者中這種提前終止的變異株均與野毒株同時(shí)存在.為進(jìn)一步研究變異毒株的生物學(xué)意義,我們通過(guò)定向點(diǎn)突變,成功的在模板P3.8Ⅱ的基礎(chǔ)上構(gòu)建了五種P基因變異株,并在此基礎(chǔ)上將包含不同突變點(diǎn)的全基因質(zhì)粒通過(guò)磷酸鈣轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞.通過(guò)轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),五種不同的P基因變異株均可表達(dá)并分泌HBsAg和HBeAg,證明轉(zhuǎn)染質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)可正常表達(dá)和分泌,但五種變異株與野株