嗜麥芽窄食單胞菌臨床株的耐藥現(xiàn)狀及分子耐藥機(jī)制研究.pdf

1、【目的】 了解廣東省湛江、深圳兩地區(qū)嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥現(xiàn)狀和耐藥水平；掌握嗜麥芽窄食單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的種類和水平及其與耐藥性的關(guān)系；證實(shí)嗜麥芽窄食單胞菌流行株耐藥性與外膜蛋白的相關(guān)性；分析主動(dòng)外排系統(tǒng)與嗜麥芽窄食單胞菌耐藥的相關(guān)性；用PCR擴(kuò)增耐藥基因(qacE△1-sul Ⅰ、int Ⅰ1)并對(duì)其進(jìn)行定位，以分析其與耐藥的相關(guān)性，為臨床治療嗜麥芽窄食單胞菌感染合理應(yīng)用抗生素及流行病學(xué)研究提供依據(jù)和指導(dǎo)。 【方法

2、】 1對(duì)臨床標(biāo)本中分離的55株嗜麥芽窄食單胞菌進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。 2 對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌進(jìn)行抗生素敏感性試驗(yàn)： 2.1 采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)測定嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)21種抗生素的敏感性； 2.2 采用瓊脂稀釋法測定嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)6種抗生素的最低抑菌濃度(MIC)。 3 嗜麥芽窄食單胞菌β-內(nèi)酰胺酶的分析： 3.1 表型確證實(shí)驗(yàn)紙片法進(jìn)行超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的測定； 3

3、.2 亞胺培南-EDTA 紙片增效法檢測金屬β-內(nèi)酰胺酶。 4 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對(duì)外膜蛋白(OMP)進(jìn)行分離、鑒定。 5 檢測泵抑制劑(CCCP)對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌氟喹諾酮類敏感性的影響。 6 堿裂解法抽提嗜麥芽窄食單胞菌的質(zhì)粒，PCR 擴(kuò)增嗜麥芽窄食單胞菌耐藥基因(qacE△1-sul Ⅰ、int Ⅰ1)并對(duì)其進(jìn)行定位分析。 【結(jié)果】 155株嗜麥芽窄食單胞菌在各臨床標(biāo)本

4、中的分布分別為痰和氣管吸出物45株占81.82％，尿液5株占9.09％，血液3株占5.45％，胸水和膽汁各1株占1.82％。感染人群主要以60歲以上年齡段為主，占74.5％(41/55)。ICU、呼吸內(nèi)科的分離率分別為30％、22％。 2 嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)21種抗生素的藥敏結(jié)果顯示：對(duì)頭孢唑林、頭孢西丁全部耐藥。對(duì)頭孢噻肟、頭孢曲松、亞胺培南、氨芐西林/舒巴坦、紅霉素、氨曲南、頭孢吡肟、四環(huán)素的耐藥情況十分嚴(yán)重，耐藥率分別為

5、98.18％、98.18％、96.36％、94.55％、94.55％、90.91％、87.27％、74.55％。而對(duì)米諾環(huán)素、左氧氟沙星、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、替卡西林/克拉維酸表現(xiàn)為較高的敏感性，其敏感率分別為94.55％、92.73％、87.27％、69.09％、67.27％。對(duì)10種以上抗菌藥物耐藥的臨床株共51株，占總分離數(shù)的92.73％，其中多重耐藥株大部分為同時(shí)對(duì)10-15種抗菌藥物耐藥的菌株。 3 瓊脂稀釋法測定對(duì)

6、6種抗菌藥物的耐藥率均高于K-B 法，兩種方法對(duì)慶大霉素的耐藥率測定結(jié)果差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，而對(duì)另外5種抗菌藥物的耐藥率差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4 嗜麥芽窄食單胞菌的ESBLs陽性率為34.55％(19/55)，金屬B-內(nèi)酰胺酶陽性率達(dá)96.36％(53/55)。ESBLs陽性菌株與ESBLs陰性菌株對(duì)哌拉西林等19種抗菌藥物的耐藥程度差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5 深圳、湛江兩地區(qū)的

7、嗜麥芽窄食單胞菌臨床株對(duì)哌拉西林等21種抗菌藥物的敏感性差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 6 SDS-PAGE 檢測嗜麥芽窄食單胞菌的主要外膜蛋白都有9條左右，對(duì)四環(huán)素敏感的菌株，其外膜蛋白均出現(xiàn)相對(duì)分子質(zhì)量約20 000的條帶減弱。 7 55株嗜麥芽窄食單胞菌共篩選出9株外排泵陽性菌，CCCP 在體外能增強(qiáng)FQS抗菌活性，主動(dòng)外排機(jī)制既存在于FQS耐藥株，也存在于FQS 敏感株，對(duì)耐藥株影響更大。 8 嗜麥芽

8、窄食單胞菌質(zhì)粒攜帶率為7.27％(4/55)。以55株細(xì)菌總DNA為模板，intⅠ1 基因陽性率為9.09％(5/55)，qacE△1-sul Ⅰ基因陽性率為7.27％(4/55)；以提取的質(zhì)粒為模板，4株攜帶質(zhì)粒的臨床株中檢出int Ⅰ1、qacE△l-sulⅠ基因陽性株各為1株。 【結(jié)論】 1嗜麥芽窄食單胞菌引起的感染以呼吸道為主，感染人群以老年人多見。 2 抗生素敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示：湛江深圳兩地嗜麥芽窄食單胞

9、菌的耐藥現(xiàn)狀十分嚴(yán)重，多重高度耐藥株廣泛分布。 3 產(chǎn)生金屬β-內(nèi)酰胺酶是嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥的主要原因。 4 嗜麥芽窄食單胞菌外膜蛋白的缺失、表達(dá)減弱或增強(qiáng)與細(xì)菌耐藥有一定的相關(guān)性。 5 嗜麥芽窄食單胞菌對(duì)氟喹諾酮類耐藥與主動(dòng)外排泵有關(guān)，泵抑制劑CCCP可部分逆轉(zhuǎn)這種耐藥性。 6 Ⅰ類整合子的存在和qacE△l-sulⅠ基因的表達(dá)參與嗜麥芽窄食單胞菌磺胺類藥物耐藥，與磺胺類藥物高度