茶樹的RAPD標(biāo)記向SCAR標(biāo)記轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、茶樹是我國重要的經(jīng)濟作物之一,栽培歷史悠久,分布廣泛,而且種質(zhì)資源極為豐富。然而茶樹是多年生異花授粉的木本植物,在常規(guī)的遺傳研究中有許多難以解決的問題。DNA分子標(biāo)記可為茶樹提供準(zhǔn)確、可靠的遺傳標(biāo)記,對于茶樹遺傳多樣性的研究和優(yōu)質(zhì)品種資源的鑒定都具有重要作用。 近年來發(fā)展起來的RAPD標(biāo)記技術(shù)已廣泛應(yīng)用于茶樹遺傳育種與遺傳多樣性的研究,但RAPD技術(shù)容易受反應(yīng)條件的影響,重復(fù)性和穩(wěn)定性較差,因此發(fā)展特異性PCR標(biāo)記技術(shù)成為今后茶

2、樹分子生物學(xué)新的研究方向之一。SCAR標(biāo)記是在RAPD技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型分子標(biāo)記技術(shù),相對其他分子標(biāo)記,操作簡單,成本低,重復(fù)性好,提高了分子標(biāo)記輔助選擇育種的效率,非常適合于大量樣品的快速分析,在水稻、玉米、油菜、小麥等作物中已取得了一定的成功,然而在茶樹遺傳育種中SCAR標(biāo)記的開發(fā)和應(yīng)用研究剛剛起步。因此,今后可以加強SCAR標(biāo)記在茶樹育種方面的開發(fā)和應(yīng)用研究工作。 本實驗中以安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹品種園的10個茶樹品

3、種為實驗材料,采用改良的SDS法提取它們的基因組DNA,并運用優(yōu)化的RAPD反應(yīng)體系對茶樹基因組DNA進行遺傳差異分析。隨機引物S234、S89、S4分別在龍井長葉、白毫早、福云6號中擴增得到長度為1185bp、498bp、1622bp的差異片段,命名為CY1185、BHZ498、FY1622。根據(jù)它們的測序結(jié)果并在原有隨機引物序列的基礎(chǔ)上分別設(shè)計了1對特異引物,其中CY1185的特異引物為SA1/SA2,BHZ498的特異引物為SB1

4、/SB2,FY1622的特異引物為SC1/SC2。退火溫度為55℃時,SB1/SB2可以在茶樹基因組DNA中穩(wěn)定擴增,當(dāng)退火溫度提高到60℃時,SA1/SA2和SC1/SC2可以實現(xiàn)穩(wěn)定擴增,反應(yīng)的其它條件沒有改變。用這3對特異引物對10個茶樹品種的基因組DNA進行擴增均獲得了預(yù)期結(jié)果,即引物SA1/SA2只有在龍井長葉中擴增出唯一的一條擴增帶,引物SB1/SB2只有在白毫早中擴增出唯一的一條擴增帶,引物SC1/SC2只有在福云6號中擴