雙氯芬酸鈉對大鼠骨髓間充質干細胞增殖凋亡及成骨分化的影響.pdf

1、目的：通過不同濃度的雙氯芬酸鈉干預全骨髓貼壁法培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞(Bonemarrow mesenchymal stem cells，BMSCs)，觀察雙氯芬酸鈉對體外培養(yǎng)的SD大鼠骨髓間充質干細胞增殖、凋亡及成骨分化的影響。
　　方法：應用全骨髓貼壁法進行原代培養(yǎng)，并通過表面抗原和成骨、成脂分化能力鑒定其為BMSCs，并計算其細胞倍增時間。采用不同濃度的雙氯芬酸鈉(6.4mg/L，3.2mg/L，1.6mg/L，0.8mg/

2、L，0.4mg/L)干預BMSCs，通過MTS法檢測雙氯芬酸鈉對BMSCs增殖的影響;通過AnnexinⅤ-FITC法檢測雙氯芬酸鈉對BMSCs凋亡的影響。不同濃度的雙氯芬酸鈉干預BMSCs，AnnexinⅤ/PI雙染法檢測雙氯芬酸鈉對BMSCs細胞周期的影響。不同濃度的雙氯芬酸鈉進行干預誘導BMSCs成骨分化，21天后茜素紅染色，觀察鈣結節(jié)形成情況。成骨誘導培養(yǎng)BMCSs，6.4mg/L的雙氯芬酸鈉干預，分別在第3天、7天以及14天進

3、行ALP染色，并提取總RNA采用RT-PCR法檢測成骨相關基因(ALP、OCN和β-actin)的表達情況。統(tǒng)計分析:應用SPSS20.0軟件進行分析，各試驗組資料統(tǒng)計量均以均數(shù)±標準差(x±s)表示，多樣本均值之間比較采用方差分析，兩兩比較應Dunnett-t檢驗，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。
　　結果：細胞倍增時間約為28小時。雙氯芬酸鈉藥物干預細胞相對增值率較對照組明顯下降，細胞的生長抑制率明顯升高，各組細胞數(shù)量減少，形態(tài)

4、改變（胞漿集中，核較明顯，失去典型的梭型，部分細胞發(fā)生凋亡，核固縮），上述改變與藥物的濃度呈相關性。PI染色流式檢測結果顯示絕大部分的細胞停滯在G1/G0期，隨著藥物濃度的升高，進入分裂期的細胞也隨之明顯減少。茜素紅染色發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，隨著雙氯芬酸鈉濃度的上升，鈣結節(jié)的數(shù)量呈減少的趨勢，6.4mg/L組茜素紅染色幾乎沒有鈣結節(jié)形成。ALP染色結果顯示與對照組相比實驗組的ALP的表達明顯減少。PCR結果顯示:在成骨分化誘導的第3天實驗

5、組以及對照組ALPmRNA、OCNmRNA表達均較低;在誘導成骨分化第7天，實驗組與對照組ALPmRNA表達均明顯升高，實驗組ALPmRNA表達升高趨勢較弱，OCNmRNA表達下降明顯，對照組OCNmRNA表達與第3天相比基本無差異;成骨分化第14天，對照組ALPmRNA表達量出現(xiàn)明顯下降，實驗組ALPmRNA表達與第7天相比無明顯差異，實驗組OCNmRNA表達基本無變化。
　　結論：
　　1、雙氯芬酸鈉能夠明顯抑制大鼠BM