大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡及分化的影響.pdf

1、目的：
　　觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)條件培養(yǎng)基對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)凋亡及分化的影響。
　　方法：
　　提取第3代大鼠BMSCs條件培養(yǎng)基,進(jìn)行濃縮。利用無(wú)水乙醇對(duì)NSCs進(jìn)行凋亡的誘導(dǎo),后通過(guò)AnnexinV/PI法比較加入條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)組和未加入的對(duì)照組NSCs和NSCs分化后細(xì)胞的凋亡情況。對(duì)兩組NSCs進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、對(duì)NSCs分化后細(xì)胞進(jìn)行蛋白印跡實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè),比較兩組NSCs分化情況

2、。
　　結(jié)果：
　　在加入了BMSCs條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)組,NSCs的凋亡率明顯低于對(duì)照組。在加入BMSCs條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)組,24 h內(nèi)見(jiàn)懸浮生長(zhǎng)的NSCs球開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)。至第3 d,所有懸浮細(xì)胞球基本貼壁生長(zhǎng),大量細(xì)胞從中爬出,伸出突起。第7 d時(shí),伸出細(xì)胞交織成網(wǎng)。對(duì)貼壁分化后的NSCs進(jìn)行免疫化學(xué)染色,其表達(dá)神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的特異性蛋白。而未加入條件培養(yǎng)基的對(duì)照組,NSCs仍呈懸浮生長(zhǎng),未見(jiàn)大量細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)及分化。將貼

3、壁分化第七天的NSCs進(jìn)行免疫熒光發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組表達(dá)少突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物MBP的細(xì)胞數(shù)要高于對(duì)照組,而表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的細(xì)胞數(shù)則有所減低,表達(dá)神經(jīng)元標(biāo)志物MAP-2的細(xì)胞數(shù)兩組則無(wú)明顯差別。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)表明,加入了條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)組其MBP的表達(dá)要高于對(duì)照組,同時(shí)GFAP的表達(dá)較對(duì)照組有所減低,MAP-2則兩者無(wú)明顯差異,這一結(jié)果與免疫熒光染色觀察到的相符。
　　結(jié)論：
　　在完全去除BMSCs本身的情況下,含有大鼠