嗜熱擬青霉J18胞外β-木糖苷酶的純化和性質(zhì).pdf

1、本文以嗜熱擬青霉J18為木糖苷酶的出發(fā)菌種，研究了其液體發(fā)酵產(chǎn)胞外β-木糖苷酶的條件和該酶的純化和性質(zhì)，主要結(jié)果如下： 通過(guò)單因素試驗(yàn)對(duì)嗜熱擬青霉J18液體發(fā)酵的產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明：5％的粒度為0.45 mm～0.9 mm的玉米芯，1％尿素，初始pH 6.5，45℃下培養(yǎng)5 d，產(chǎn)β-木糖苷酶的活力最高，達(dá)3.15 U/ml，比酶活為2.43U/mg。該菌能夠利用廉價(jià)的天然玉米芯為碳源，尿素為氮源液體發(fā)酵高產(chǎn)胞外β-木糖

2、苷酶，同木聚糖作碳源和有機(jī)氮作氮源相比，降低了生產(chǎn)成本。 以嗜熱擬青霉J18發(fā)酵液為粗酶液，經(jīng)硫酸銨沉淀，DEAE-52，Q-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析純化后，得到電泳純的β-木糖苷酶。純化過(guò)程中酶活回收率為3％，純化倍數(shù)為35.6，比酶活為37.7U/mg。SDS-PAGE法測(cè)定酶的分子量為53.5 kDa，Superdex 75凝膠過(guò)濾法測(cè)定酶的分子量為51.8 kDa，說(shuō)明該酶為單亞基蛋白。

3、 酶學(xué)性質(zhì)分析表明，嗜熱擬青霉J18木糖苷酶的最適反應(yīng)溫度為55℃，最適pH為6.5。在45℃以內(nèi)及pH 6.5～9.0范圍內(nèi)穩(wěn)定。對(duì)酶活力有抑制作用的物質(zhì)包括：Fe<'2+>、Fe<'3+>、Co<'2+>、Cu<'2+>、Ni<'+>、Mn<'2+>、Li<'+>、Mg<'2+>和SDS，而Na<'+>、K<'+>、Zn<'2+>、Ca<'2+>和β-巰基乙醇對(duì)酶活有促進(jìn)作用。將電泳純的β-木糖苷酶用于水解木寡糖，TLC分析顯示：