中國部分地區(qū)2010-2013年基因VII型新城疫病毒F、HN基因分子特征分析及病毒樣顆粒的構建.pdf

1、新城疫（New Disease，ND），俗稱亞洲雞瘟，是由新城疫病毒強毒株引起的一種急性、高度接觸性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將新城疫列為法定報告疫病。我國在《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中把新城疫列為16種國內優(yōu)先防治的動物疫病之一。新城疫病毒屬于副粘病毒科（Paramyxoviridae），禽腮腺炎病毒屬（Avulavirus）。對于新城疫的防控我國主要依賴疫苗免疫防控新城疫。目前，我國禽群中普遍使用

2、的弱毒疫苗主要為基因II亞型的La Sota疫苗株，而我國的優(yōu)勢流行株為VII型。在遺傳進化學上疫苗株與流行株之間相差較遠，且抗原差異性也較大，被認為是該病在中國持續(xù)暴發(fā)和免疫失敗的主要原因。雖然La Sota弱毒疫苗能對雞群提供良好的臨床保護效果，但在雞群中仍會出現(xiàn)大量的排毒現(xiàn)象。為更好的應對ND流行，新城疫新型疫苗的研制對新城疫具有更好的防控意義。本文主要從以下三個方面進行相關研究：
　　試驗一：中國部分地區(qū)2010-2013

3、年基因VII型NDV F和HN基因分子特征分析
　　本實驗整理了NCBI收錄的2012年以前中國分離到的所有NDV F全基因序列，共計452株。通過核苷酸比對分析，證實近年來我國主要的流行毒株為ClassII的基因VII型。對2010-2012年分離的代表株45株和2013年春季流調代表株14株，共計59株NDV進行了分子遺傳進化分析，結果證實基因VIIb亞型52株、基因VIId型3株、基因VIIh4株。隨后對59株NDV的F和H

4、N基因重要功能區(qū)域的核苷酸序列進行分析，結果發(fā)現(xiàn)，部分毒株F基因裂解位點和HN基因的重要抗原位點發(fā)生了明顯的變異。
　　試驗二：新城疫 VII型疫苗候選株的篩選
　　在NDV F、HN基因分子特征分析的基礎上，挑選8株VII型NDV。經(jīng)致病指數(shù)（MDT、ICPI、IVPI）以及F裂解位點序列分析，證實8株NDV均為強毒株；攻毒保護試驗結果顯示，La Sota滅活疫苗能對分離株的攻擊提供臨床保護，但在攻毒后的第1、3、5天仍可

5、出現(xiàn)排毒現(xiàn)象。最終根據(jù)毒力、雞胚繁殖性能及排毒情況篩選出一株基因VII型疫苗候選株。
　　試驗三：基因VII型新城疫病毒樣顆粒疫苗的構建
　　使用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(tǒng)，以pFastBac Dual轉移載體為骨架，將基因VII型疫苗候選株的全長F、HN、M、NP基因片段克隆到pFastBac Dual供體質粒上，構建出重組供體質粒。隨后轉化DH10Bac感受態(tài)細胞，獲得重組桿狀病毒基因組。經(jīng)轉染獲得重組桿狀病毒