表達新城疫病毒F、HN基因和傳染性喉氣管炎病毒gB基因重組禽痘病毒的構建及其免疫效力的研究.pdf

1、新城疫、傳染性喉氣管炎和雞痘均是雞的主要呼吸道疾病，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的損失。盡管傳統(tǒng)方法制備的疫苗在疾病的控制上曾經發(fā)揮重要的作用，但隨著動物疾病清除計劃的進行，需要用更加安全的、能夠區(qū)分野毒感染的新型疫苗來替代常規(guī)疫苗。 禽痘病毒載體疫苗以其特有的優(yōu)勢在疾病的控制中起到了重要的作用，以禽痘病毒為載體已經研制出許多種重組病毒疫苗，其中有的已紀商業(yè)化。構建表達多個病原體基因的重組禽痘載體疫苗對于面臨多種疾病威脅的養(yǎng)禽業(yè)來說尤其具

2、有重要的意義。 本實驗利用同源重組將新城疫病毒(NDV)的F和HN基因、傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)的gB基因以及報告基因LacZ插入雞痘病毒(FPV)的017株的復制非必需區(qū)，其中NDV的F、HN基因、ILTV的gB基因以及報告基因LacZ是在早晚期啟動子LP2EP2的控制下，大腸桿菌報告基因LacZ在晚期啟動子P11的控制下。經過10輪藍斑純化獲得了包含了NDV的F和HN基因、ILTV的gB基因以及報告基因LacZ的重組雞

3、痘病毒，稱為rFPV-F/HN/gB。經PCR方法證明rFPV-F/HN/gB基因組中含有NDV的F基因、HN基因和ILTVgB基因；間接免疫熒光試驗和Western-blot試驗表明NDV的F、HN蛋白和ILTVgB蛋白在rFPV-F/HN/gB感染的CEF細胞中獲得表達。與親本毒相比，重組病毒在病毒的復制和致雞胚成纖維細胞的病變方面無顯著不同。 為了檢測重組病毒對SPF雞的保護效果，將60只四周齡的SPF雞分為四組，第一組翅

4、下刺種1000PFUrFPV-F/HN/gB(20只)、第二組免疫ND弱毒疫苗(LaSota，10只，0.125ml/只)、第二組免疫ILT弱毒疫苗(10只，0.1ml/只)，第四組為非免疫對照雞(20只)。免疫后4周將重組病毒組和非免疫組隨機分為兩組，分別為1、5組和4、6組。其中1、2、4組共30只雞用致死劑量(103EID50)的NDVF48E9株進行肌肉注射，另外的3、5、6組共30只雞用ILTV王崗強毒(500EID50)經喉

5、內接種。免疫和攻毒后每周采集血清進行抗體檢測。并于攻毒后檢測排毒、統(tǒng)計發(fā)病和死亡率。結果表明：與對照組相比，免疫后3周rFPV-F/HN/gB免疫組能誘發(fā)機體產生抗新城疫病毒的ELISA抗體，但抗體水平明顯低于LaSota免疫組，NDV攻毒前沒有檢測到ND的HI抗體，而LaSota免疫組在免疫后2周就顯示有HI抗體；同時重組病毒誘發(fā)機體產生抗ILTV的ELISA抗體，抗體水平也低于ILT弱毒疫苗免疫組。而非免疫組在攻毒前檢測不到任何抗體

6、。LaSota免疫雞獲得完全保護，rFPV-F/HN/gB免疫組的部分雞(7/10)抵抗ND強毒的攻擊，免于死亡，而且死亡雞發(fā)病和死亡時間明顯滯后于對照組。NDV的分離檢測結果表明：rFPV-F/HN/gB可以有效的控制排毒，但是與LaSota弱毒免疫組相比，不能完全控制病毒的繁殖。ILTV攻擊后，rFPV-F/HN/gB和ILT弱毒疫苗免疫雞對死亡的保護均為10/10，對發(fā)病的保護為7/10，非免疫對照組有1/10的死亡率和10/10