bFGF、BMP-2基因轉(zhuǎn)染對(duì)羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨功能影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：分析bFGF和BMP-2基因單獨(dú)和聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)體外培養(yǎng)的羊BMSCs的增殖和骨向分化的影響，比較Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相關(guān)基因于轉(zhuǎn)染前后相對(duì)表達(dá)量的差別，為構(gòu)建組織工程骨的種子細(xì)胞做理論依據(jù)。
　　方法：全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)羊BMSCs，構(gòu)建bFGF、BMP-2慢病毒載體，分別轉(zhuǎn)染羊BMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染率，將得到bFGF組、BMP-2組、聯(lián)合組，對(duì)照組細(xì)胞，提取RNA后使用實(shí)時(shí)定量PCR和Western

2、-blot檢測(cè)Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相關(guān)基因的mRNA水平和蛋白水平相對(duì)表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：（1）慢病毒載體轉(zhuǎn)染的BMSCs的轉(zhuǎn)染率達(dá)95.4％，且 bFGF和BMP-2均穩(wěn)定表達(dá)。（2）mRNA水平上，在 Collagen-Ⅰ和OC基因，bFGF主效應(yīng)、BMP-2主效應(yīng)、交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2均能促進(jìn)BMSCs的兩基因高表達(dá)，且bFGF與BMP-2間存在協(xié)同作用。聯(lián)合

3、基因轉(zhuǎn)染時(shí)Collagen-Ⅰ和OC基因表達(dá)高于單一基因轉(zhuǎn)染。但在OPN基因，bFGF主效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。多元析因顯示，bFGF和BMP-2兩因子均能增高成骨相關(guān)基因 mRNA表達(dá)且存在協(xié)同的交互作用（P﹤0.05）。（3）蛋白水平上，在Collagen-Ⅰ、OC和OPN蛋白，bFGF主效應(yīng)、BMP-2主效應(yīng)、交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2均能促進(jìn)BMSCs的三個(gè)成骨相關(guān)基因蛋白高表達(dá)，且b

4、FGF與BMP-2間分別存在協(xié)同作用。聯(lián)合基因轉(zhuǎn)染時(shí)Collagen-Ⅰ和OC蛋白表達(dá)高于單一基因轉(zhuǎn)染。多元析因顯示，bFGF和BMP-2兩因子均能增高成骨相關(guān)蛋白表達(dá)且存在協(xié)同的交互作用（P﹤0.05）。
　　結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)顯示bFGF和BMP-2在成骨相關(guān)基因的表達(dá)上具有協(xié)同的交互作用，且聯(lián)合轉(zhuǎn)染組中的Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相關(guān)基因mRNA水平和蛋白水平相對(duì)表達(dá)量均最高，該組細(xì)胞的成骨功能最強(qiáng)，適合作為組織工