shh基因轉染大鼠骨髓間充質干細胞的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:Sonic Hedeghog(SHH)基因通過上調多種血管生長因子的表達來參與血管發(fā)生。內源性的SHH途徑在發(fā)生心肌缺血后也會被激活,由于SHH基因有促進血管新生的作用,因此SHH基因可能作為潛在的治療策略應用于心肌缺血。骨髓間充質干細胞(MSC)可向肌性細胞和內皮細胞分化,在心肌缺血損傷后促進新生血管形成和心肌重構,改善心功能。此外MSC還可接受多種載體的基因轉染并在體內分化后仍可保持良好的遺傳穩(wěn)定性,故還可作為基因治療的靶細胞

2、。
　　 目的:研究對大鼠MSC進行重組SHH基因修飾的可行性。為下一步基因與細胞聯(lián)合干預心肌缺血大鼠模型做好準備。
　　 方法:克隆Wistar大鼠SHH基因并測序鑒定。構建PCDNA3.1-SHH真核表達載體,采用密度梯度離心-貼壁培養(yǎng)法獲取Wistar大鼠MSC,流式細胞術測定細胞表面標志CD34、CD44、CD45和SH3。采用Nucleofector電轉染方法將PCDNA3.1-SHH真核表達載體轉染至MSC,

3、Western-Blot檢測鑒定SHH在MSC中的表達情況。
　　 結果:RT-PCR擴增的大鼠SHH基因編碼序列(CDS)片段,經酶切和測序鑒定與Genebank一致。采用密度梯度離心-貼壁培養(yǎng)法可獲取大鼠MSC,檢測結果CD44、SH3陽性,CD45、CD34陰性,Western-Blot檢測證實Nucleofector方法可將SHH基因轉染進大鼠MSC,并獲得有效表達,而轉染空質粒的MSC未檢測到表達。
　　 結論

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