乳酸脫氫酶抑制劑 Calloflavin,對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示子宮內(nèi)膜癌高危人群多為肥胖，患有糖尿病，高血壓等代謝異常疾病的婦女，而糖代謝與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系也日益得到重視。大多數(shù)腫瘤細(xì)胞利用糖酵解代謝途徑產(chǎn)生的ATP，作為其能量提供的主要方式。靶向針對(duì)糖酵解途徑抑制腫瘤生長(zhǎng)，日益成為治療腫瘤的新策略。Galloflavin(GF)作為新一代乳酸脫氫酶抑制劑，目前還沒(méi)有此藥物干預(yù)

2、子宮內(nèi)膜癌的基礎(chǔ)研究。因此，本研究通過(guò)分析GF對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的影響，探討其作用的可能機(jī)制。
　　方法:
　　MTT法觀察終濃度為0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L GF分別作用于ECC-1、Ishikawa子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株72h后，檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。以乳酸脫氫酶試劑盒檢測(cè)GF干預(yù)后乳酸脫氫酶的

3、活性的變化;以乳酸定量試劑盒檢測(cè)GF干預(yù)后乳酸生成量變化;以ATP定量試劑盒檢測(cè)GF干預(yù)后ATP生成量的變化;以2-NBDG檢測(cè)GF干預(yù)后葡萄糖攝取量的變化;以DCFH-DA檢測(cè)GF干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)產(chǎn)生量(ROS)的變化;以流式細(xì)胞儀、AnnexinV/FITC標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡;以蛋白印跡法分析GF對(duì)BCL-2、MCL-1，Cleaved Caspase3蛋白表達(dá)的影響。同時(shí)行Annexin V-PI染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)草氨酸鹽

4、對(duì)其凋亡的影響。
　　結(jié)果:
　　GF抑制Ishikawa，ECC-1細(xì)胞的增殖并且隨GF濃度增加，增殖抑制增加，呈劑量依賴(lài)性。GF處理細(xì)胞后乳酸脫氫酶的活性顯著下降，乳酸產(chǎn)生量下降，ATP產(chǎn)生量下降，葡萄糖攝取量下降?；钚匝跷镔|(zhì)產(chǎn)生量增加，Annexin V-PI染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)均表現(xiàn)細(xì)胞凋亡比例逐漸增高，證實(shí)了GF具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用;GF蛋白印跡檢測(cè)表明GF可使Cleaved Caspase3表達(dá)升高，BCL-2